颠茄qPCR内参基因筛选及其TRⅡ基因表达分析.pdf

本研究是在“重庆市甘薯工程技术研究中 心平台支持下完成的 本研究由国家863计划“东莨菪碱植物代 谢产物生物反应器研制(2011从100605) 项目资助 目录 摘要………………………………………………………………………………………………………………．I Abstract…………………．………………．…………．……………………．…………………………………．．III 第1章文献综述……………………………………………………………………………………………1 1．1实时荧光定量PCR(qPCR)技术研究简史…………………………………………．．1 1．2qPCR………………………………………………………………………………………………………1 1．2．1qPCR基本原理……………………………………………………………………………………．1 1．2．2 qPCR的技术原理…………………………………………………………………………………．2 1．2．3荧光化学基团……………………………………………………………………………………3 1．2．4 qPCR的定量方法………………………………………………………………………………．4 1．2．5 qPCR的优越性及应用…………………………………………………………………………．．5 1．3内参基因在qPCR中的应用……………………………………………………………………5 1．3．1内参基因的必要性……………………………………………………………………………。5 1．3．2理想的内参基因应具备的条件……………………………………………………………．6 1．3．3植物中常用的内参基因种类……………………………………………………………．6 1．3．4内参基因稳定性的分析方法…………………………………………………………8 1．3．5已报道的茄科植物的qPCR内参基因………………………………………………9 1．4颠茄概况………………………………………………………………………………………………．10 1．5托品酮还原酶(1Rs)研究进展…………………………………………………………………．10 第2章绪论…………………………………………………………………………………………………．．13 2．1研究目的和意义……………………………………………………………………………………．13 2．2研究范围和内容……………………………………………………………………………14 2．3技术路线…………………………………………………………………………………14 第3章材料与方法…………………………………………………………………………………………．15 3．1实验材料及试剂耗材…………………………………………………………………15 3．1．1植物材料………………………………………………………………………………………．15 3．1．2菌株和质粒………………………………………………………………………………………．15 3．1．3仪器和设备………………………………………………………………………………………．15 3．1．4试剂盒及试剂购买……………………………………………………………………15 3．1．5常规试剂和培养基的配置……………………………………………………………………．16 3．2常规方法和操作步骤……………………………………………………………………………．．16 3．2．1植物RNA的提取与检测…………………………………………………………………．．16 3．2．2 DNA产物的琼脂糖凝胶电泳…………………………………………………………………．17 3．213目的条带的回收…………………………………………………………………………………17 7 3．2．4连接反应…………………………………………………………………………………………l