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miR-21 调控肝癌细胞增殖转移分子机制的研究 中文摘要 miR-21 调控肝癌细胞增殖转移分子机制的研究 中文摘要 microRNAs(miRNAs)是一类进化上高度保守的内源性非编码小分子 RNA，它能 、 够结合于靶基因 mRNA 的3 -UTR 区域，阻遏靶基因的翻译，从而抑制基因表达。 miRNAs 在许多病理、生理过程中，包括癌症发生及癌细胞转移中扮演重要的角色。 miRNAs 作为一类新型的调节因子，既可以作为原癌基因发挥作用，也可以作为抑癌 基因调节细胞的生物学特性。miR-21 作为一个典型的原癌基因，在肿瘤的的发生发 展过程中同样扮演令人瞩目的角色，如肝癌中miR-21 的异常表达能够促进肝细胞癌 的生长与转移。作为 miR-21 代表性的靶基因，癌细胞中 PTEN 的失活导致了下游 PI3K/AKT 和 ERK 信号通路的激活，从而增强了癌细胞的增殖与转移能力；然而， 在PTEN 沉默的癌细胞中，miR-21 表达的变化同样引起了AKT/ERK 信号通路活性 的变化，这表明细胞中除了PTEN 还存在其它机制调节AKT/ERK 信号通路。hSulf-1 是一种细胞膜上的肝素去硫酸酯酶，它能够对细胞膜上的硫酸肝素蛋白聚糖（HSPG ） 去硫酸化，从而阻断肝素结合生长因子信号的传导。通过调节肝癌细胞系中 miR-21 的表达，发现miR-21 抑制PTEN 表达的同时也能够抑制hSulf- 1 的表达。因此，本研 究旨在探索miR-21 对hSulf-1 及下游信号通路的影响，进一步研究miR-21 对肝癌细 胞增殖、侵袭和转移的影响，为肝癌的临床基因治疗提供新的靶点。 第一部分 肝癌细胞系miR-21 的表达及其与成瘤能力的关系 【目的】检测不同细胞系中miR-21 的表达，确定miR-21 与肝癌细胞转移能力的 相关性。 【方法】应用荧光实时定量PCR 检测miR-21 在不同转移性肝癌细胞系及正常细 胞系中的表达水平；建立肝癌细胞小鼠体内移植瘤模型，两周后处死，并测量肿瘤形 成情况，比较不同转移性肝癌细胞的瘤形成能力，确定miR-21 表达水平与肝癌细胞 转移性能之间的相关性。 【结果】荧光实时定量PCR 表明，miR-21 在肝癌细胞系MHCC-97H （MHCC-97H: 6.73 ± 1.01 ）中表达高于 MHCC-97L 、SMMC-7721 （MHCC-97L: 4.35 ± 0.53, I 中文摘要 miR-21 调控肝癌细胞增殖转移分子机制的研究 SMMC-7721: 1.10 ± 0.13 ）中表达；动物成瘤实验表明高转移性肝癌细胞MHCC-97H 比SMMC-7721 细胞形成更多更大的瘤块。 【结论】miR-21 在高转移性的癌细胞中高表达，miR-21 的高表达与癌细胞的转 移呈正相关。 第二部分 miR-21 对肝癌细胞侵袭、迁移、增殖及成瘤能力的影响 【目的】研究miR-21 对肝癌细胞侵袭、迁移、增殖及成瘤能力的影响。 【方法】采用划痕实验、Transwell 实验检测miR-21 对肝癌细胞侵袭、迁移的影 响；应用 MTT 实验、细胞软琼脂克隆形成实验研究 miR-21 对肝癌细胞增殖、成瘤 能力的影响。 【结果】划痕实验、Transwell 实验结果表明，与实验对照组相比，miR-21 过表 达载体转染 SMMC-7721 细胞促进了细胞的侵袭及迁移能力，miR-21 抑制剂转染 MHCC-97H 细胞抑制了细胞的侵袭与转移能力；细胞增殖实验结果表明，SMMC-7721 转染miR-21 过表达载体后促进了细胞的增殖，MHCC-97H 转染miR-21 拮抗剂后减 弱了细胞的增殖能力；细胞软琼脂克隆形成实验表明，miR-21 过表达载体转染 S