信号增强电化学免疫分析法与研究.pdf

摘要 免疫分析信号的增强技术一直以来是免疫分析领域研究的一个重要方面，它 对于提高分析的灵敏度有着至关重要的意义。电化学仪器具有简便、灵敏、易于 微型化等优点。因此，开发新的电化学信号增强免疫分析技术无疑可以推动免疫 分析的发展。为此，本文在增强免疫分析信号尤其是电化学免疫分析信号方面做 了一下工作： 1．提出了一种基于直接吸附蛋白质于多孔纳米金膜表面的免疫传感器。在这 004M乙酸铅的 种方法中，我们通过在一0．5 M氯金酸和O V(vs．Ag／AgCI)电解0．08 混合溶液在玻碳电极表面得到一层多孔纳米金膜，并将羊抗人IgG抗体吸附于纳米 金膜表面，在夹心免疫反应完成后，利用辣根过氧化物酶催化底物生成不溶物并吸 附于电极表面，由于不溶物的吸附，使得电子转移阻抗大大增加。这种放大了的阻 009 抗信号与人IgG的浓度在O．011-1lng／ml范围内成线性关系，检测限为0 ng／ml。 2．提出了一种基于生物催化金属沉积结合阳极溶出伏安检测的电化学放大免 疫分析法。在这种方法中，抗体首先通过一层自组装膜而被固定于金电极表面。 夹心免疫反应后，碱性磷酸酯酶标记的抗体被捕捉于电极表面。碱性磷酸酯酶催 化抗坏血酸磷酸酯水解成抗坏血酸，生成的抗坏血酸将银离子还原并沉积在蛋白 质修饰过的电极表面。然后通过电化学法将银氧化溶出并用阳极溶出伏安法来检 测溶出的银离子。和用直接伏安法检测催化生成抗坏血酸相比，用阳极溶出伏安 法检测金属离子更为灵敏。因为沉积的银与酶催化生成的抗坏血酸的量有关，而 抗坏血酸的量又取决于连接在电极上的酶的量，所以溶出峰电流的大小与目标抗 原的量相关。这种结合了酶的催化放大作用和阳极溶出伏安法检测金属离子的高 灵敏度的免疫分析法显著地提高了分析的灵敏度。 3．提出了一种基于双电极转换系统作为信号放大装置的电化学免疫分析法。 这种装置由两个用盐桥连接起来的电解池，一个免疫电极，一个检测电极以及连结 于它们之间的导线组成。吸附有抗体的免疫电极在发生夹心免疫反应后，被作为 阳极置于酶反应液中，另外一支检测电极置于银沉积液，免疫电极表面的碱性磷酸 酶催化磷酸抗坏血酸酯水解生成抗坏血酸，生成的抗坏血酸通过这种装置被在阴 极区的银离子氧化，使得单质银被沉积于检测电极表面，经过30分钟的酶催化反应， 大量的金属银便沉积于电极表面。由于酶的催化产物是在产生的同时，就被银离 Ⅱ 信号增强电化学免疫分析法研究 子氧化，基本上不会因催化产物扩散到溶液中而使分析信号受到损失。通过阳极溶 出法直接检测电极表面的沉积银的量，可以大大提高分析的灵敏度，同在同一支电 极上的化学沉积法相比，这种将酶催化反应和金属沉积过程分在两个不同的电解池 中的电化学法避免了因金属沉积于蛋白质表面对酶的活性的影响。 4．提出了一种基于辣根过氧化物酶(HRP)对银沉积的抑制作用的新型电化 学信号放大免疫分析法。在这种方法中，抗体首先通过一层自组装膜而固定在金 电极上，经过夹心免疫反应后，使HRP酶也结合在电极表面。当有过氧化氢(H202) 存在时，HRP酶抑制了对苯二酚还原银离子在电极表面沉积为单质银的过程。我 们采用了线性扫描伏安法检测电极表面沉积的银的量，结果表明银的溶出峰电流 与人免疫球蛋白IgG的浓度在50--2500he,／mL范围内成线性关系，检测下限为 35 ng／mL。 5．提出了一种基于生物催化沉积金属纳米粒子并结合金属纳米粒子继续催化 金属沉积使它本身增大的信号连续放大电化学免疫分析法。我们先将羊抗人抗体 吸附于聚苯乙烯微孔板上，在免疫反应及催化沉积完成后，将微孔板内的金属溶解 采用溶出伏安法测定溶解的金属离子。由于这种方法结合了酶的催化作用及金属 纳米粒子的催化作用进行连续放大，分析的灵敏度得到了显著地提高。溶出峰电 流与人IgG的浓度在0．1～10ng／ml范围内成线性关系。显然，这种这种利