- 1、本文档共90页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
优秀毕业论文,完美PDF格式,可在线免费浏览全文和下载,支持复制编辑,可为大学生本专业本院系本科专科大专和研究生相关类学生提供毕业论文范文范例指导,也可为要代写发表职称论文提供参考!!!
摘要
制RNA干扰的分子机制.我们试图利用马铃薯Y病毒的HC-pro为诱饵蛋白,通过酵母双杂交从
烟草cDNA文库中筛选出与RNA干扰有关的蛋白因子。利用Clontech公司的酵母双杂交试剂盒,
在宿主萤AHl09中,通过酵母菌的自我重组把烟草叶片的cDNA文库构建在cDNA文库载体
半乳糖苷酶活性检测,共有136个克隆显示a—x.半乳糖苷酶活性。在这136个克隆中,共测出
共转化到酵母菌AHl09中,在四缺培养基上作进一步的筛选和a—x-半乳糖苷酶活性检测,有20
个cDNA质牧表现互作阳性,分别命名为szl—sZ20.通过核苷酸和氮基酸序列比较.发现除了2
个未知功能蛋白外,其余的互作阳性因子大致可分为4类:一类是参与植物光合作用和碳水化合
物代谢的蛋白。如:参与叶绿体分裂的ParA家族的ATPase、参与三羧酸循环的转酮醇酶、参
与TC^循环乌头酸酶、多糖磷酸化酶和果糖激酶;第二类是一些与植物抗逆有关的因子,有山梨
醇脱氢酶、真菌及伤口诱导蛋白BARWiN、过氧化氢酶catalose以及半胱氨酸蛋白酶等:第三类
是参与基因转录、翻译和蛋白代谢的蛋白因子,有多锌指结构蛋白、20SProteasomebeta亚基、
I)NA聚合酶家族蛋白等;第四类是有关氨基酸和氮代谢的酶。有天冬氮酸蛋白酶、谷氨酰胺合成
酶、胺氧化酶、丝氨酸/苏氨酸脱氢酶等。挑选互作阳性相对较强的SZI和SZ2cDNA质粒作为重
点研究。
多锌指结构蛋白,含有8个COIC锌指结构.N端是连续的lcS序列,在第7和第8个锌指结构之
氨酸变为甘氨酸,第35位由天冬氨酸变为组氨酸。
利用与SZ2核苷酸序列高度同源的番茄基因的核苷酸序列设计出5’端引物,用SZ2的cDNA
设计出3’端引物,通过RT-PCR扩增SZ2
cDNA全长,核苷酸和氮基酸序列比对结果表明:SZ2
是20SProteasome蛋白酶复合体的beta亚基。
转化酵母菌株INVScI,经过D_半乳糖诱导表达后,提取酵母菌总蛋白进行免疫共沉淀。实验结
果表明,SZl和SZ2都能与llC-pro蛋白互作。
性蛋白。
SZI和SZ2与植物RNA干扰之问的联系正在继续研究。
关键词:HC—pro,RNA干扰,酵母双杂交,锌指结构蛋白,proteasome,免疫拭沉淀
Abstract
PVYisa RNAj
f}lC-pro)of potent suppressor.To
Pot/viraihelper-componentproteinase
mechanisminwhichthe RN灿.weusedthe as
themolecular HC-presuppresses HC-pro
inv髂tigate
in
baittoScreenfor tobaccoeDNA a
lfbrary
interactingproteins妇a yeasttwo-hybridsDtem.1飞e
constructedwiththefull Pw fusedwiththe
bait was length HC-pro pGBKT7DNA-binding
plasmid
leaf
thenwastransferredintothe SUajnsY187.11”tobacco
domain(pGBKTT-HC-pro,Tip+).andyeast
totheGAL4activation
文档评论(0)