补阳还五汤抗脑缺血损伤及增强脑缺血耐受作用和机制及研究.pdf

中文摘要 补阳还五汤抗脑缺血损伤及增强脑缺血耐受 的作用和机制研究 摘 要 目的 通过动物实验证实补阳还五汤(Buyan曲uanwuTang， BYHwT)具有抗脑缺血损伤作用，并从抗氧化应激和调控 凋亡相关基因蛋白表达等角度探讨其作用机制。在此基础 ischemic 上，建立小鼠脑缺血耐受(brain ischemic 型，观察BYHWT干预脑预缺血(cerebral 具有增强CIP脑保护效果，促进脑缺血耐受形成的作用，并 初步探讨其作用机制，进一步为临床使用BⅧWT预防和治 疗脑缺血性疾病提供实验依据。 方法 第一部分补阳还五汤抗脑缺血损伤的作用和机制研究 将48只健康昆明小鼠随机分为三组：假手术组、缺血 损伤组和中药预防组，每组n=16。中药预防组灌服补阳还 五汤煎剂，每次10m1／娃(体重)，2次／日，连续7d；假手 术组和缺血损伤组灌服等量生理盐水。7d后缺血损伤组和 中药预防组均用微动脉夹夹闭双侧颈总动脉20min，然后恢 复灌流；假手术组只暴露双侧颈总动脉20min，但不阻断血 流。术后24h从各组随机选取8只小鼠断头处死，迅速剥取 全脑，左侧半球低温保存，采用生化方法检测脑组织SOD 活性和MDA含量；右侧半球用4％多聚甲醛溶液固定，常 规石蜡切片，采用免疫组化方法检测海马组织Bax和bcl．2 中文摘要 蛋白表达。其余小鼠于术后7d全部处死，迅速剥取全脑， 冠状切取视交叉后1至4mm脑片，多聚甲醛固定，常规石 蜡切片，HE染色，光镜下观察海马CAl区组织学分级和神 经元密度(neuronal 蛋白同上。 第二部分补阳还五汤增强脑缺血耐受的作用和机制研究 将64只健康昆明小鼠随机分为四组：假手术组、缺血 损伤组、BIT模型组和中药干预组，每组n=16。中药干预 。繁 组灌服补阳还五汤煎剂，每次lOml／kg(体重)，2次／日， 连续7d；假手术组、缺血损伤组和BIT模型组灌服等量生 理盐水。灌药第5天中药干预组和BIT模型组均用微动脉 夹夹闭双侧颈总动脉6min作为预处理，然后恢复灌流；假 手术组和缺血损伤组只暴露双侧颈总动脉6min，但不阻断 血流。灌药第7天缺血损伤组、中药干预组和BIT模型组 均阻断双侧颈总动脉血流20min，然后恢复灌流；假手术组 只暴露颈总动脉20min，但不阻断血流。末次手术后24h从 各组随机选取8只小鼠断头处死，迅速剥取全脑，左侧半球 低温保存，采用生化方法检测脑组织SOD活性和MDA含 量。其余小鼠于末次手术后7d全部处死，迅速剥取全脑， 冠状切取视交叉后1至4mm脑片，多聚甲醛固定，常规石 蜡切片，眦染色，光镜下观察海马CAl区组织学分级和神 经元密度(ND)，免疫组化检测Bax和bcl一2蛋白同上。 结果 第一部分补阳还五汤抗脑缺血损伤的作用和机制研究 1．术后7d海马CAl区组织病理学改变 光镜观察发现，假手术组海马CAl区无明显组织学损 中文摘要 伤，组织学分级多为O级和1级。缺血损伤组海马CAl区 组织学损伤明显，主要表现为锥体细胞缺失较多，残留的锥 体细胞排列松散不规则，多数锥体细胞胞核固缩，组织学分 级多为2级和3级，与假手术组相比有显著性差异(PO．05)。 中药预防组海马CAl区组织学损伤轻微，组织学分级多为 1级和O级，与假手术组相比无显著性差异(PO．05)，而 与缺血损伤组相比差异显著(PO．05)。 通过计算海马CAl区神经元密度得知，假手术组 (ND=212土27 n／mm)和中药预防组(ND=184士32n／mm) 神经元密度均明显高于缺血损伤组(ND=73土36n／mm， PO．01)，而假手术组和中药预防组无明显差异(PO．05)。 2．术后24h脑组织SOD活性和MDA含量变化 75．82±36．97 缺血损伤组小鼠脑组织SOD活性(1 U／m1)与假手