参芎注射液对腹膜透析液诱导腹膜间皮细胞损伤干预作用及研究.pdf

中文摘要 背景： 腹膜功能衰竭已成为终末期肾功能不全 ESRD 患者腹膜透析技术性 失败的最重要的原因，并成为制约腹膜透析 PD 发展的“瓶颈。研究 表明完整的间皮细胞层可以显著廷缓腹膜超滤衰竭的进程，组织病理学也 证实腹膜功能衰竭早期的重要特征表现为腹膜间皮细胞 PMC 的损伤和 腹膜上皮一间皮细胞转分化 EMT 。因此，防治腹膜纤维化的重要靶点是 阻止或逆转腹膜间皮细胞损伤的发生或治疗EMT所导致的后果如细胞的 EMT过程中关键的细胞因子，如果能抑制TGF-D的过度表达，就能抑制其 下游相应的细胞因子，从而减缓EMT的发生和发展，维护PMC的结构和功 能，维持正常的腹膜功能。 目的l 通过观察高糖腹透液诱导的大鼠腹膜纤维化模型，揭示其对腹膜超滤 功能的影响及对PMC的形态、数量及功能变化规律，以及TGF-D1、碱性 AQP一1 等细胞因子在腹膜组织中的表达情况。并通过中药复方制剂参 芎注射液进行干预，探讨在大鼠腹膜纤维化过程中参芎注射液对PMC保护 的可能机制。并通过临床研究，观察参芎注射液对腹透患者超滤量的影响 及其对PMC的保护作用。 方法： 1、大鼠腹膜透析模型的建立及超滤量的观察：SD大鼠分A、B两组， 00 均给予4．25％腹透液 PDF 透析，A组透析剂量为1ml／Kg，B组透析 剂量为200ml／Kg；分别测定两组在1h、2h、3h、4h超滤量。 2、动物实验部分：建立高糖诱导的大鼠腹膜纤维化模型，4o只大鼠 随机分为空白组、模型组、低剂量组和高剂量组，每组1o只。空白组： 100 不作任何处理和干预；模型组：4．25％PDFml／Kg腹腔注射，每日1 87．5 次；低剂量组：4．25％PDF 射，每日1次；高剂量组：4．25％PDF75 腹腔注射，每日1次。实验4周后处死大鼠作检测。行4h腹膜平衡试验 Plus 6．0图像分析系统测量间皮下红色的纤维组织厚度。大鼠腹膜标本 行超薄切片，透射电子显微镜观察病理改变。电化学发光法检测腹透引流 1、 学分析，每张切片随机选择10个高倍视野 200× ，计数阳性细胞，以 10个高倍视野总数作为阳性细胞数。 3、临床研究部分：选择武汉市中西医结合医院64例病情稳定，透析 时间超过3个月的腹透患者，予参芎葡萄糖注射液50ml加入每袋 2L 腹透液，行标准CAPD，疗程为7天。治疗前后行标准腹膜平衡试验，生 化指标检测，腹透引流液CAl25浓度检测，计算透析前后的尿素清除指数 KT／V ，肌酐清除率 Ccr 。 4、统计学方法 统计软件为SPSS17．0，实验结果均为定量数据，用均数±标准差 X ±s 表示，各组间差异性比较采用单因素方差分析并进行两两比较 LSD 法 ，P 0．05 双侧 为差异有显著性意义。 结果l 3．84ml 11．14ml，较1h的9．1 5．09 滤量1 ml和16．1ml较1h、 第3h、4h超滤量显著高于A组同时间段的超滤量 p 0．05 。 2、空白组、模型组、低剂量组和高剂量组之间超滤量的比较，空白 3．75土1．17 3±1．10ml明显高， 组的平均超滤量为1 ml，较模型组4．5 低剂量组的超滤量有明显改善，达到7．46土I．23mi，高剂量组有更为显 著的改善，为9．73士1．11ml。经统计学处理各组间均有显著性差异 P 0．05 ． 3、空白组、模型组、低剂量组和高剂量组之间腹膜转运功能的比较， 3±0．03 D／Pcr以模型组升高最为显著，达到0．84±0．07，较空白组0．5 均能减缓D／Pcr的上升，以高剂量组更为明显。经统计学处理各组间均有 4、采用电化学发光法检测各组腹透引流液CAl25浓度及表达率，空 1．99±1．37 U／ml， 白组CAl25浓度为1 U／ml，CAl25表现率为2．19±0．30 U／ml，0．51±0．12 模型组有显著下降，分别为3．53±0．51 U／ml。低剂 5 U／ml和1．01士0．1U／ml；高剂量干预后为 量干预后上升为6．46±0．89 7．96±O．97 6 U／ml，1．32±O．1U／ml。各组组问比较均有统计学差异 P 0．01 。 5、PMC形态及各组腹膜厚度比较，空白组为22．2±5．1¨m，模型组 8．3“m，低、高剂量组有不同程度增厚，分别为57．9 明显增厚为97．7±1 镜下，空白对照组腹膜由一层扁平间皮细胞覆盖，间皮细胞基本完整、连 续分布，间皮下覆有疏松结缔组织，结缔组织未见明显增生；模型组及低 剂量、高剂量组壁层腹膜明显增厚、疏松，间皮细胞脱落，问皮下有大量 的胶原纤维沉积，尤以模型组明显。 6、超微结构的比较。空白对照组：腹膜间皮细胞结构完整，细胞无 皱缩、变形；细胞游离面微绒毛丰富，分布均