新型Tet-on系统调控慢病毒载体介导大鼠THGDNF基因脑内移植治疗大鼠帕金森病.pdf

中文摘要 帕金森病（PD ）的主要病变是脑部黑质含黑色素的神经元大量死亡，以致 纹状体内神经递质多巴胺（DA ）减少。酪氨酸羟化酶（TH ）是多巴胺合成代谢 的限速酶，胶质源性神经营养因子（GDNF ）对DA 能神经元具有特异性营养作 用，在纹状体同时引入TH、GDNF 基因是理想的 PD 治疗方法之一。由于在脑 内长期恒量表达TH、 GDNF 基因可能产生副作用，因此TH、GDNF 基因的表 达量需要依据患者的临床表现进行调控。 Tet-on 系统是专用于调控哺乳动物细胞基因表达的慢病毒载体，其表现的特 性显示其应用于人类有很好的前景，但该系统因有相对高的基础表达而使其应用 受限。本实验采用改良的Tet-on 系统，其四环素调控的反式作用子为rtTA2s-M2 ， 四环素应答元件（TRE ）的启动子为小鼠白蛋白启动子（Palb ）。在四环素类抗 生素作用下，rtTA2s-M2 与位于慢病毒载体上的TRE 元件相互作用，启动Palb 下游目的基因的表达。 本实验目的 采用改良的Tet-on 系统，构建携带大鼠TH 和GDNF 双基因 的慢病毒载体并包装成慢病毒（Lv-TH-GDNF ），在体内、体外观察四环素类抗 生素对TH 、GDNF 基