奶牛乳腺炎大肠杆菌curli菌毛基因克隆、序列分析及载体构建.pdfVIP

奶牛乳腺炎大肠杆菌curli菌毛基因的克隆、序列分析 及载体构建 中文摘要 奶牛乳腺炎是奶牛的主要疾病之一，主要由病原微生物感染引起，由 大肠杆菌引起的奶牛乳腺炎在高产奶牛中是很常见的，给奶牛业造成了巨 大的经济损失。目前国内还缺少预防奶牛乳腺炎的效果较好的疫苗，我国 众多奶牛养殖户在顽固性乳腺炎面前束手无策。针对以上问题，本课题在 探索乳腺炎基因工程疫苗方面展开了研究。本研究分四部分如下： 第一部分：奶牛乳腺炎大肠杆菌的分离鉴定 对山东省内规模化奶牛场患乳腺炎的奶牛采样并进行大肠杆菌分离 鉴定。本试验所建立的PCR方法与传统的细菌分离培养检测方法相比， 减少了病原菌检测所需的时间和费用，并且敏感性和特异性都有所提高。 这对于奶牛乳腺炎的防治有着重要的意义。 第二部分奶牛乳腺炎大肠杆菌csgA基因的克隆、序列分析及载体构建 菌毛的主要亚单位。利用PCR技术从大肠杆菌临床分离株扩增出编码 测序鉴定后，获得克隆菌。提取克隆菌质粒，经BamHI、Hindl]I双酶切 后，回收cse,A片段与pET32a载体连接，构建成该基因的原核表达质粒 并对其活性和功能的研究奠定了基础。 第三部分奶牛乳腺炎大肠杆菌csgB基因的克隆、序列分析及载体构建 CsgB蛋白是由csgB编码产生的，是组成curli菌毛的较小亚单位， 奶牛乳腺炎大肠杆菌curli菌毛基因的克隆、分析及载体构建 其主要作用在CsgA分泌至细菌表面装配时作为聚合的核心，通过蛋白之 间的交互作用导致CsgA蛋白构象的改变，聚合形成菌毛。此外，CsgB 还是菌毛上的小分支的主要组分。利用PCR技术从大肠杆菌临床分离株 I、SalI 经筛选和测序鉴定后，获得克隆菌。提取克隆菌质粒，经BamH 双酶切后，回收csgB片段与pET32a载体连接，构建成该基因的原核表 蛋白，并对其活性和功能的研究奠定了基础。 第四部分奶牛乳腺炎大肠杆菌csgC基因的克隆、序列分析及载体构建 CsgC以成熟的形式集合在周间质，对CsgA细胞外的组装是很重要 的，能够促进curli的合成。利用PCR技术从大肠杆菌临床分离株扩增出 选和测序鉴定后，获得克隆菌。提取克隆菌质粒，经BamHI、H砌Ⅲ双 酶切后，回收esgC片段与pET32a载体连接，构建成该基因的原核表达 蛋白，并对其活性和功能的研究奠定了基础。 esgC基因 2 山东农业大学硕士论文 and of Construction Cloning、Sequence analysis recombinant ofcurliFibersin expressionplasmid Escherichia colistrainin cattlewith Dairy mastitis Abstract Mastiffscaused Escherichiacoliisonethe by of mostcommonmicrobial diseasein cattle，whichcausedeconomiclossfor hi曲。producingdairy large the and