海洋适冷蛋白酶产生菌的筛选、酶的分离纯化及其适冷机制的分析.pdf

海洋适冷蛋白酶产生菌的筛选、酶的分离纯化 及适冷机制研究 研究生姓名：陈秀兰 所在单位：山东大学生命科学学院 摘要 f海洋中存在着种类繁多的微生物类群，是获取新药和新酶的宝贵资 源，、具有很好的开发前景。极端环境微生物是微生物学领域中研究的热点， 适冷菌是极端微生物中的一类，在海洋中广泛分布，是分离适冷酶的良好 材料。适冷酶在低温下具有较高的催化效率，在需要低温催化的行业如洗 涤、食品、奶制品、皮革加-1-、医药和化妆品中具有较高的应用价值，因 而引起各国科学家的广泛关注J山东大学为了加强海洋生物技术研究，成 立了海洋生物技术研究中心。我们对来自海洋，特别是来自深海的适冷菌 分泌的适冷蛋白酶进行了较为系统的研究。 1、海洋不同生态位的产蛋白酶的适冷菌的筛选及粗酶性质研究? f高纬度海水和大部分深海海底终年温度较低，是分离适冷菌和适冷酶 的良)好材料。从不同生态位的海水或海底淤泥中分离出了分泌蛋白酶的适 冷菌，并对其中部分菌株的蛋白酶特性进行了研究： 1．1从渤海湾浅表海水中分离纯化到150株产蛋白酶的适冷菌，对其 中5株产酶量较高的菌株进行了较为详细的研究。这5株菌的最适生长温 度均在20-25C，最高生长温度均不超过45℃。它们所产的蛋白酶的最适 酶活温度在35,40℃，对熟都比较敏感，属于适冷蛋白酶。这些蛋白酶的 最适催化pH为7．帖9．0，与海水的pH较为一致。 1．2从日本冲绳槽附近深度为560-1855米的深海海底淤泥中分离到 200株产蛋白酶的适冷菌。对其中三株适冷菌Pseudomonas sp．SM9913、 Pseudomonas sp．SM9915和SM9905的生长和产酶特性、所产蛋白酶的性 质和菌的适冷机制进行了研究。 堕重兰坐查查兰苎主兰垒兰壅————————————一 菌株 长温度 酶温度 适温塞 兰!竺!!兰：兰 菌株鐾篓鐾兰兰竺竺 15C 10C 35C适冷性最好、对热最敏感 P．sp．SM9913 4C 4012适冷性较好，对热较敏感 2012 15 P．sp．SM9915 !坚!!箜 垄。旦 垫兰 垫．旦 望堡丝董：塑垫至墼壁一 塞明：生适垄低洹巫撞主丕囿的苴挂压主凶蛋自酶盟低渔艘适廑壁星 丕回曲1 1．3适冷菌Pseudomonassp．SM9913在低温下生长速率较高，所产蛋 白酶为典型的适冷蛋白酶，在低温下催化效率高。实验结果表明显直直挂 查低迢工煎生益速室塑握挂酶查低温王筮奁的焦丝夔窒豆能是透猃菌 旦￡g应盥Q盥￡墅：墨丛窆212适廛低湿的匮釜途叠：户百，一～ 2、Pseudomonas sp．SM9915分泌的蛋白 sp．SM9913和Pseudomonas 酶的分离纯化及性质研究． 对Pseudomonas sp．SM9915和P．sp．SM9913菌 。结果表明P．sp．SM9915菌株至少分泌三种蛋白 酶。这三种蛋白酶的最适酶活温度有所不同，分别为40℃、40℃、45C， 并且，这三种蛋白酶的热稳定性也有所差别。Pseudomonassp．SM9913至 少分泌两种蛋白酶，分别命名为MCP．01和MCP．02。蛋白酶MCP-01的 最适酶活温度为30,-,3512，比一般的中温蛋白酶低20(2左右，酶的适冷性 很好，同时对热非常敏感，是典型的适冷酶。而MCP-02最适酶活温度为 50--55℃，对冷的适应性较差，对熟比较稳定，已经接近中温蛋白酶。表 明：二仝莹拯查透捡进化过程生：虽直数量自醛娄差丕星回生进化：互能