严重颅脑损伤后细胞凋亡状态及其相关基因Bcl-2、Bax表达分析.pdf

严重颅脑损伤后细胞凋亡状态及相关 基因Bcl-2、Bax表达的研究 浙江大学医学院 外科学(神经外科) 研究生 李谷 研究生导师 刘伟国教授 中文摘要 随着经济和交通手段的日益发展，颅脑损伤的发生率和因伤致死率、致残率均 逐年增加。从分子水平对颅脑损伤后可能存在的基因和蛋白表达异常进行研究，有 助于进一步阐明颅脑损伤的机理，从而指导l临床治疗，提高颅脑损伤的治愈率、降 cell death，ICD)。它是细胞在一定的生理或病理条件下，遵循自身的程序，自己结束其 生命的生理性死亡。细胞凋亡是多细胞生物生命过程中不可缺少的部分，它是保证 多细胞生物个体正常发育成熟和维持正常生理过程所必须的。当组织细胞凋亡异常 cell 2) (过高或过低)时，可导致各种疾病的发生。Bcl．2(B lymphoma／leukemia associated 和Bax(Bcl一2 x)均为细胞凋亡的调控基因，在细胞凋亡发生中起重要作 用。Bd-2基因编码26KD的膜蛋白，主要存在于线粒体外膜上，Bd-2的过量表达 能抑制多种因素诱导的细胞凋亡。Bax基因编码一个21KD的蛋白，Bax蛋白以同源 二聚体的形式存在，但Bax的作用与Bel-2完全相反，[划Bsx二聚体在体内过量表 、 达时，可促进细胞凋亡。{本课题采用50只健康SD雄性大鼠并用改进的Feeney自由 l 落体损伤装置进行致伤打击，应用分子生物学方法——脱氧核糖核苷酸末端转移酶 nickend transferasemedia钯d 介导的缺口末端标记法(terminal-deoxynucleotidyl 免疫反应阳性的细胞进行观察、计数、并进行统计学处理，从分子水平来探讨细胞 凋亡状态及Bcl．2、Bax蛋白的表达与严重颅脑损伤的关系，以阐明创伤性颅脑损伤 的损伤机理，为临床上颅脑外伤的救治提供新的思路。 ， ， f材料与方法 l、动物：选用健康雄性SD大RS0只，体重2009左右。随机分为2组，分别为损 伤组和未损伤组，每组25只。 2、致伤：两组大鼠均经氯胺酮(40mg／kg)腹腔麻醉，用牙科磨钻在左项骨矢 状缝后1．5mm、中线旁2．5mm处钻一直径4．5mm的骨窗。24小时后，损伤组采J【}』改进 的Feeney由落体损伤装置进行打击，致伤冲击力为0．088N·S，造成严重脑挫裂伤。 未损伤组不予打击，余处理同损伤组。 及未损伤组大鼠各5只，完整取出全脑，将脑组织制成石蜡标本，切片备用。 4、检测：采用TUNEL法原位标记DNA片段检测凋亡细胞。采用sP法进行Bcl-2、 Bax的免疫组织化学染色。 的结果，并计数，计算出平均阳性率(LI)，数据用均数±标准差(泵±s)表示。 for windows统计软件包进行 6、统计学处理：所有数据在计算机上用SPSSl0．0 数据统计处理。采用的统计方法有t检验和参数的相关性检验。 ．2． 结果 I、在损伤组大鼠脑组织中，TUNEL阳性细胞数明显较多，统计结果显示，损