O-GlcNAc糖基化在神经疾病中的作用.pdf

O-GIcNAc糖基化在神经疾病中的作用 中文摘要 中文摘要 第一部分弟一郡分 目 的： 方法： 理细胞，改变细胞内O-GlcNAc糖基化水平。利用免疫共沉淀的方法研究 111sulin干13K-AKT信号通路中可以被O-GlcNAc糖基化的组成部分。采用蛋白免 疫印迹技术分析不同细胞内O-GlcNAc糖基化对AKT和GSK-313磷酸化和活性的 影响。 结果： GSK-3 13的Ser9的 酸化水平，改变其活性。降低细胞内O-GlcNAc糖基化，下调GSK-3 13的Ser9磷酸化没有影响 磷酸化，但升高细胞内的O-GlcNAc糖基化对GSK-3 的GSK-3B的磷酸化没有明显的影响。 酸化，但对GSK-313的磷酸化没有影响。 结 论： 中文摘要 O-GlcNAc糖基化在神经疾病中的作用 本研究显示O-GlcNAc糖基化对AKT和GSK-313的调节具有蛋白特异性和细 化调节AKT的活性。 第二部分 弟一郡分 O-GlcNAc糖基化在脑缺血中对细胞凋亡的影响 目 的： 研究O-GlcNAc糖基化是否及如何引起细胞凋亡，探讨脑缺血早期升高的 O-GlcNAc糖基化对细胞凋亡的影响。 方法： 蛋白质免疫印迹和组织免疫荧光染色分析小鼠大脑中动脉阻断(Middle Cerebral Artery 3的活性测定和Tunel测定检测小鼠脑缺血早期海马 AKT的磷酸化水平。Caspase 3的活化和PAPR的水解。利用免疫沉淀，定点突变，蛋白 早期凋亡标志Caspase 调节AKT影响细胞凋亡。 结果： 1)蛋白质免疫印迹和组织免疫荧光染色结果显示，小鼠MCAO模型脑缺血 胞。 凋亡样改变，流式细胞仪检测到更多的凋亡细胞，蛋白免疫印迹分析结果显示过 3激活，PARP蛋白被水解。 上调细胞内O-GlcNAc糖基化，Caspase II O-GicNAc糖基化在神经疾病中的作用 中文摘要 3而引起细胞凋亡；过表达AKT，可以改善过表达 酸化下降，进而活化Caspase OGT引起的细胞凋亡，但过表达AKT的突变体，则不能逆转OGT引起的细胞凋 亡。 淀AKT，缺血侧海马AKT的O-GlcNAc糖基化要比对照侧高。· 结论： 于应激反应，细胞内的O-GlcNAc糖基化增加，而使AKT的磷酸化及活性下降， 3，启动凋亡发生。因此， 磷酸化的BAD减少，经过系列反应，进而激活Caspase O-GlcNAc糖基化在脑缺血早期的细胞凋亡中可能起重要作用。 第三部分 的自噬和Tau病变 目 的： 病患者脑内下调的O-GlcNAc糖基化对Fox01介导的tau病变的影响。 方法： 如何影响自身的降解。蛋白免疫印迹分析细胞核和细胞质中Fox01，研究O-GlcNAc 测Fox01报告基因的荧光素酶活性，实时定量PCR检测Fox01靶基因的表达， Fox01的活性。利用前脑神经元特异性敲除OGT小鼠，蛋白免疫印迹技术检测 III 中文摘要