p4vp--peg-b-p4vp嵌段共聚物用于毛细管电泳分离碱性蛋白质.pdfVIP

摘 要 摘 要 复杂生物体系中的蛋白质的分离分析是一项具有挑战性的任务，是生物医学 领域研究中的一个重要部分，需要最先进的分离技术和复杂精细的仪器装置。毛 细管区带电泳（capillary zone electrophoresis ，CZE ）及其衍生出的一系列分离技 术不仅具有分离效率高、分析时间短的优点，而且对样品和试剂消耗极少，非常 适合蛋白质的分离分析，在蛋白质组学研究中有巨大的应用潜力。利用毛细管电 泳（capillary electrophoresis ，CE ）技术分离蛋白质的应用研究，主要集中于人体 体液、农产品和药物的分析上，主要面对的问题是被分析蛋白在毛细管壁的吸附 问题。毛细管壁对蛋白质的吸附会造成一系列危害：如样品回收率降低，基线不 稳定，结果的重复性变差，定性定量困难等，最终还将极大地影响毛细管柱的使 用寿命。因此人们一直在探索各种方法，以减小毛细管电泳过程中的蛋白质吸附 现象，提高分离效率，物理吸附涂层方法由于涂层的制作简单且具备一般分离所 需的稳定性而备受青睐。 本论文对阳离子聚合物物理涂层的设计合成与其在分离碱性蛋白质时的效 果及机理进行了研究，主要工作如下： 1．使用原子转移自由基聚合（ATRP ）方法合成了具有不同聚（4-乙烯基吡 啶）（P4VP ）嵌段长度的聚（4-乙烯基吡啶）-b-聚乙二醇-b-聚（4-乙烯基吡啶） （P4VP-b-PEG-b-P4VP ）三嵌段聚合物，并用核磁共振氢谱及凝胶渗透色谱对其 结构及分子量分布进行了表征。 2. 将P4VP-b-PEG-b-P4VP 用作毛细管内壁的物理涂层材料，对碱性混合蛋 白质进行了分离，并研究了缓冲液pH 对涂层性能的影响，比较了不同P4VP 嵌 段长度的三嵌段聚合物涂层的性能，以及和两嵌段聚合物涂层相比的优缺点。三 嵌段聚合物P4VP-b-PEG-b-P4VP 具有pH 敏感性，通过缓冲液pH 的调控可以控 制电渗流的速度，调节待分析组分的分离度和分离时间。 3 ．测量了裸管和三嵌段聚合物涂层管中蛋白质与毛细管壁间的静电相互作 用，证明了阳离子聚合物涂层对碱性蛋白质吸附的屏蔽作用，并进一步测算了三 种碱性蛋白质的电泳迁移率，说明了混合蛋白质出峰的顺序和其等电点及相对分 子量的关系。 关键词： 毛细管电泳 蛋白质分离 聚乙二醇 聚4-乙烯基吡啶 三嵌段 聚合物 I ABSTRACT ABSTRACT The separation of proteins in complex biological mixtures is a challenging task and an important part in biomedical research field, which requires the most advanced separation technologies and sophisticated instrumentation available to human. Capillary zone electrophoresis (CZE) and its derivative methods are separation technologies very suitable for the analysis and separation of proteins and have great potential for becoming one of the key tools in proteome research, concerning its advantages of high efficiency, short analysis time and minimum consumption of both reagents and samples. In the applications, the