季胺化壳聚衍生物作为抗菌剂的研究.pdfVIP

摘要 摘 要 本文首先通过Eschweiler-Clarke 反应合成了N,N-二甲基壳聚糖（DMC ），然后进 一步用碘甲烷室温下甲基化合成了氧上无甲基化的N,N,N-三甲基壳聚糖（TMC ），并 通过延长反应时间得到了不同季胺化度的TMC 。将得到的TMC 在低温碱性条件下与 一氯乙酸反应一定时间，合成了不同取代度 N,N,N- 三甲基-O- 羧甲基壳聚糖 （TMCMC ）；在碱性条件下与3-氯-2-羟丙基三甲基氯化铵（CHPTMAC ）或3-氯-2- 羟丙基三乙基氯化铵（CHPTEAC ）反应一定时间，分别得到了不同取代度的N,N,N- 三甲基O- （2-羟基-3-三甲基氨基丙基）壳聚糖 (TMHTMAPC)和N,N,N-三甲基O- （2- 羟基-3-三乙基氨基丙基）壳聚糖（TMHTEAPC ）。同时还将壳聚糖与一氯乙酸反应制 1 备了不同取代度的 O-羧甲基壳聚糖（CMC ）。将得到的产物通过核磁共振氢谱（H NMR ）、红外光谱（FTIR ）、元素分析（EA ）及热重分析（TGA ）进行了表征。并研 究了季胺化壳聚糖衍生物在弱酸(pH 5.5)和弱碱(pH 7.2)条件下对革兰氏阳性细菌金 黄色葡萄球菌和革兰氏阴性细菌大肠杆菌的抗菌性能。 1H NMR 、FTIR 及 EA 的分析结果表明，TMC 、TMCMC 、TMHTMAPC 及 1 TMHTEAPC 已成功合成。通过 H NMR 计算了TMC 的季胺化度，通过EA 计算了 其余产物的取代度（DS ）。 结果表明，TMC 的N-季胺化度、TMCMC 的羧甲基化度及TMHTMAPC 的O- 季胺化度均随时间延长而增加。TMC 在反应96 小时之后（TMC 96H ）季胺化度达到 94.7%，考虑到所使用的壳聚糖存在4.4% 的乙酰化，可以认为TMC 已接近完全季胺 化。通过元素分析计算的DMC 的二甲基化度超过100%，考虑到元素分析的误差， 可以认为DMC 已完全二甲基化。在DMC 完全二甲基化的前提下，可以通过EA 计 算TMC 的季胺化度。在本研究中，通过EA 计算的TMC 96H 的季胺化度为97.0% 。 CMC 反应 20 小时后的取代度为 58.8%，TMCMC 反应 20 小时后的取代度为 61.5%，相比之下TMCMC 的羧甲基化度并没有明显增加。壳聚糖与一氯乙酸的反应 为非均相反应，而TMC 与一氯乙酸的反应为均相反应，应该更容易进行，而实验结 果与该设想并不一致，可能是因为TMCMC 存在带正电荷的–N(CH ) +基团及带负电 3 3 荷的–COO-基团，反应过程中生成的TMCMC 由于静电引力发生聚集，从而阻碍了反 应的顺利进行。另外，TMHTMAPC 反应20 小时后的取代度为24.7% ，而TMHTEAPC 反应 20 小时后的取代度仅为 4.34% 。其原因可能是因为反应物 CHPTMAC 与 I 摘要 CHPTEAC 结构不同，相比之下，CHPTEAC 存在有较强输水作用及较大体积的乙基 基团，由于输水作用及立体阻碍效应导致反应较难进行。 TGA 的分析结果表明，壳聚糖衍生物的热稳定性较壳聚糖差。进一步对TMC 进 行O-羧甲基化或O-季胺化修饰将降低其热稳定性。在本研究中，TMHTMAPC 的热 稳定性最差。 TMC 的抗菌活性在pH 5.5 时较pH 7.2 时强，在pH 7.2 时随取代度增加而增加， 而在pH 5.5 时随取代度增加而减小。在pH 7.2 时，非季胺化的氨基基团不带正电荷， 不能与带负电荷的细菌表面相互作用，因此其抗菌活性随取代度增加而增加。在pH 5.5 时，非季胺化的氨基基团由于质子化作用而带正电荷，因此其抗菌活性较pH