罗布麻叶中酮类化合物的分离提取及抗氧化、抗抑郁活性的研究.pdfVIP

摘 要 罗布麻叶（Apocynum venetum L. ）为夹竹桃科多年生宿根草本植物罗布麻的干燥叶， 含有多种天然活性成分，黄酮类化合物是其主要成分。大量的药理活性实验表明，罗布 麻叶中的黄酮类化合物具有多种药理和生物活性。近几年来的研究表明罗布麻叶提取物 具有抗抑郁活性，但对于单体化合物的活性能力尚无系统研究，因此，针对罗布麻叶提 取物中黄酮类化合物活性组分及单体化合物的分离提取并分析其抗氧化、抗抑郁活性的 研究对于研究开发创新性药物，以及扩大罗布麻的商业利用价值具有非常重要的理论意 义和实际应用价值。 本研究首先采用回流法、超声法和温浸法对罗布麻叶中的黄酮类化合物进行提取， 以金丝桃苷为对照品，以总黄酮的得率为评价指标，比较了以上各种提取方法的提取效 率，结果回流法的提取效果最好。在此基础上，采用三因素三水平的正交试验优化了回 流法的提取工艺，确定最佳的提取工艺条件是：18 倍量的 60%乙醇提取 3 次，每次 1 h。 探讨了快速溶剂萃取法对于罗布麻叶中黄酮类化合物的提取工艺条件，最佳的实验参数 为：70%乙醇在 70 ℃条件下提取 3 次，每次 10 min。比较了回流法和快速溶剂萃取法 的提取效率，快速溶剂法的提取液中总黄酮的含量更高，但是由于处理药材量有限，最 终总黄酮大量提取制备时仍采用回流法。快速溶剂萃取法快速、安全、操作简单，非常 适合于中药材中天然活性成分的提取。 其次，采用高效逆流色谱（HPCCC ）技术，对罗布麻叶中的活性组分及单体化合 物进行了分离提取。HPCCC 的最佳工艺条件是：溶剂体系为：乙酸乙酯：乙腈：水： 冰醋酸（5:0.8:5:0.05，v:v:v:v ）以上相作为固定相，以下相作为流动相，色谱柱柱温 -1 ，流动相的流速 2.5 mL·min-1 ，检测波长 360 nm，进样量 150 mg。 30 ℃，转速 1 500 r·min 共分离得到明显的 6 个色谱峰，各流分采用液–质联用技术（HPLC–MS ）和电喷雾多级 串联质谱（ESI–MS/MS ）以及核磁共振技术（NMR ）分析各流分的结构，确定一次性 分离得到的 4 个单体化合物分别是白麻苷、三叶豆苷、紫云英苷、乙酰化金丝桃苷，2 I 个混合物组分分别是金丝桃苷和异槲皮素组，槲皮素和山柰酚组。采用高效液相色谱技 术（HPLC ）检测各流分的纯度，采用面积归一化法计算得到，各单体化合物的纯度远 大于 95% 。以上结果表明，HPCCC 法用于分离提取中草药中的生物活性成分–黄酮类化 合物具有较高的分离效果，并且分离时间短，样品损失少，可行性操作强。 以罗布麻叶总黄酮和经过高效逆流色谱分离得到的5 个流分为样品，采用 DPPH 羟 基自由基抑制率法，研究了黄酮类化合物的抗氧化能力。结果表明：罗布麻叶中的黄酮 类化合物均具有较高的抗氧化能力，其抗氧化能力的顺序是：罗布麻叶总黄酮＞金丝桃 苷和异槲皮素混合物＞白麻苷＞三叶豆苷＞紫云英苷＞乙酰化金丝桃苷。采用体外皮质 酮对 PC-12 损伤法，对黄酮类化合物的抗抑郁活性做了评价研究。结果表明：罗布麻叶 中的黄酮类化合物均具有良好的抗抑郁活性，并且抗抑郁活性能力的强弱顺序是：金丝 桃苷/异槲皮素混合组分＞异槲皮素＞金丝桃苷＞总黄酮＞紫云英苷＞三叶豆苷＞乙酰 化金丝桃苷＞白麻苷＞槲皮素/ 山柰酚混合物组分。 关键词：高速逆流色谱；罗布麻叶；黄酮类化合物；抗氧化活性；抗抑郁活性 II Abstract Apocynum Venetum L. was the famous traditional Chinese medicine in the literature, which was perennial herb of apocynaceae. Many compositions with kinds biological activities exist in it, and the flavonoid was the primary compounds. Flavonoids