大鼠局灶性脑缺血再灌注后HIF-1a表达调控机制的研究.pdf

中文摘要 大鼠缺血性脑损伤后HIF．1仅的表达及调节机制研究 摘 要 缺氧诱导因子．1(hypoxia-inducible 衡的核心调控因子，由仅亚基和B亚基构成，其活性取决于HIF．1a亚基， 0【亚基的稳定性 HIF．1a亚基对氧高度敏感，环境氧浓度的改变可调节HIF一1 和表达，缺氧条件下HIF．1a表达增加，即可促进缺氧适应基因的表达，增 强神经元细胞对缺氧环境的适应能力而产生神经保护作用，又可诱导促凋 亡和坏死基因表达，导致细胞凋亡和坏死而产生神经毒性作用。近期研究 发现活性氧自由基(reactive oxygen 性作用报道不一。 本研究采用大鼠永久局灶性脑缺血模型和局灶性脑缺血再灌注模型 (线拴法)，通过观察缺血后脑组织形态学、血清中丙二醛(MDA)含 研究缺血性脑损伤后HIF．1Q的表达，探讨自由基对HIF．10t稳定性的影响。 第一部分大鼠永久局灶性脑缺血后HIF．10t的表达 目的：研究大鼠永久局灶性脑缺血后大脑皮层神经元ⅢF．1仅的表达。 方法：雄性SD大鼠，随机分为假手术组、缺血2h组、缺血4h组、 制备大鼠永久局灶性脑缺血模型，假手术组行手术通路，除不插线外，其 余操作步骤同手术组。HE染色法观察脑组织形态学变化，免疫组织化学 法观察脑缺血再灌注损伤后大鼠大脑皮层HIF．1a表达。 结果： 1组织形态学结果显示，缺血组大鼠大脑皮层出现神经元变性的形态 学改变，表现为神经元收缩，胞浆浓缩，胞核深染，核仁、核膜不清，细 胞周围间隙增大，以缺血后4h、8h和12h变性最为严重；假手术组未见 中文摘要 明显的组织病理学改变。 2免疫组织化学检测发现，假手术组大鼠大脑皮层神经元有弱的 蛋白表达呈双相改变，以缺血后8h最强，12h减弱，24h表达再次增强。 结论：局灶性脑缺血后HIF．1a表达呈双相改变，提示缺氧早期HIF．1旺 表达增加可能具有促细胞死亡的神经毒性作用，而后期表达则具有促细胞 存活的神经保护作用。 第二部分大鼠短暂局灶性脑缺血后HIF．1et的表达及调节机制 目的：研究大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后HIF．10t表达及ROS对其表 达的影响。 方法：雄性SD大鼠，随机分为假手术组、缺血再灌注2h组、缺血再 灌注4h组、缺血再灌注8h组、缺血再灌注12h组和缺血再灌注24h组。线拴 法闭塞MCAO带WJ备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，假手术组行手术通路， 除不插线外，其余操作步骤同手术组。取血清和脑组织，HE染色法观察 脑组织形态学改变，生物化学法测定血清中MDA水平和T-SOD活力，免 疫组织化学法观察脑缺血再灌注损伤后大鼠大脑皮层HIF．1a、Mn．SOD和 iNOS的表达。 结果： l组织形态学观察结果显示，假手术组未见明显的组织病理学改变； 局灶性脑缺血再灌注后大鼠大脑皮层出现神经元收缩、细胞周围间隙增 大、胞浆浓缩、核仁、核膜不清等神经细胞变性，这种改变一直持续到缺 血后24h。 2假手术组大鼠大脑皮层神经元HIF．1a阳性表达量少，脑缺血再灌 注损伤后HIF．1a蛋白表达明显增加，定量分析显示，HIF．1a蛋白表达量 于缺血再灌注后4h达峰值，随后表达逐渐降低，但各组表达量均明显高 于假手术组(PO．01)。 3假手术组大鼠大脑皮层神经元胞浆iNOS蛋白表达极弱；局灶性脑 缺血再灌注后iNOS蛋白表达增加，定量分析结果显示，再灌注4h阳性 表达量最多，随后逐渐下降，再灌注后24h表达明显减弱，与假手术组比 中文摘要 P0．01)。 4假手术组大脑皮层Mn．SOD蛋白阳性表达最强，脑缺血再灌注损 伤后Mn．SOD蛋白阳性表达量随再灌注时间延长逐渐减弱，与假手术组 比较均具有显著性差异(PO．05，P0．01)。 5脑缺血再灌注损伤后随再灌注时间延长血清T-SOD活力持续下 降，分别为再灌注2h组274+19U·ml～、再灌注4h组257+24U·ml～、再 灌注