高压氧对大鼠实验性脑损伤后神经细胞内CytochromeC、Bcl-2以及其Bax表达的影响.pdfVIP

郑州．^掌2004年j■士研，：生牛业饨·文 高压氧对大鼠实验性脑损伤后神经细胞内 Cytochrome 研究生刘展 导师苏芳忠 郑州大学第二临床医学院神经外科 郑州450014 摘要 目的：创伤性颅脑损伤是一种危害性很强的疾病。对于创伤性颅脑损 伤的病理生理学研究表明：多种导致“二次损伤”的因素决定了患者 的预后。对于“二次损伤”的致病机制则有不同的解释：活性氧(ROS) 的生成增加，兴奋性氨基酸的毒性作用，Ca2+超载以及毒性代谢产物 的生成等。近年来我们注意到神经细胞凋亡与“二次损伤”密切相关。 细胞凋亡是一种以“自杀”方式进行的细胞死亡过程。某些条件下可 以和坏死相互转化。通常细胞凋亡过程可以分为外源性途径以及内源 性途径。对于创伤性颅脑损伤而言，内源性途径占有主要地位。在内 源性细胞凋亡中，其关键步骤为线粒体膜通透性的改变以及线粒体内 C，CytC)的释放可以 容物的释放。其中，细胞色素C(Cytochrome 郑州．太掌2004年·啊士研究．生牛皿te土 诱导凋亡复合物的形成，进而引发Caspase3的活化，从而导致凋亡 的发生。CytC的释放过程受到多种因子的调节，其中最重要的为 Bcl．2家族成员。Bcl．2以及Bax分别作为抗凋亡以及诱导凋亡的蛋白 分子，它{find线粒体膜的相互作用与CytC的释放密切相关。高压氧 治疗作为一种临床应用已久的方法，尽管它的疗效受到某些质疑，但 仍有大量临床观察资料证实可以提高病人生活质量，改善预后。对于 高压氧作用机制的研究表明它可以减少细胞内ROS的生成，改善脑 的代{身十，减少COX．2的表达，减少Caspase3的表达以及细胞凋亡的 发生。据此我们设想：(1)高压氧的脑保护作用来源于保护线粒体膜 这种保护作用。 分为实验对照2组，每组30只。采取Freeney自由落体法复制脑外 伤模型。致伤后实验组30分钟内给予高压氧(O．25Mpa)治疗60分 钟，对照组不作任何特殊处理。将实验组与对照组大鼠分别于致伤后 3小时，6小时，12小时，24小时以及72小时断头处死(每组每个 时间段6只)，取挫伤灶周边脑组织制作快速冰冻切片以及电镜切片， 分别进行免疫组化染色以及扫描电镜观察。对于CytC染色切片采用 图像分析系统进行灰度值检测作为计量指标，对于Bcl一2和Bax染色 切片采用阳性细胞数110×40倍视野作为计量指标，结果统计采用成 组t检验。电镜照片主要观察细胞内线粒体情况。 坪州^半2004年硝士研竞生牛业论文 rome c．Bc【一2 高压晕对太置实謦性脯损伤后神控细胞内Cytoch d厦舶x表达的影响 结果：(1)对于致伤后的脑组织切片染色发现，相同时间段内(3， 小时时明显低于对照组，72小时时无明显差异。(2)电镜扫描发现， 3，6，12小时对照组线粒体明显肿胀，24小时以后两者无明显差别。 结论：(1)高压氧治疗可以于伤后24小时之内明显减少创伤性 颅脑损伤后神经细胞线粒体内CytC的释放。(2)高压氧治疗可以于 伤后72小时之内明显增加神经细胞内Bcl．2的表达。(3)高压氧治 疗可以于伤后24小时之内明显减少神经细胞内Bax的表达。(4)高 压氧治疗可以减轻伤后24小时之内神经细胞线粒体肿胀。(5)此外， 研究表明：单纯高压氧治疗并不能完全保护线粒体，阻止线粒体内容 物的释放，它作为综合治疗的一部分，可以为其他的治疗方法提供更 有力的支持。 关键词：高压氧神经细胞凋亡细胞色C Bcl．2Bax 郑州^掌2004年礓士研竞生牛生_I}支 C．Bc卜2 高压氧对太鼠喜籍性脑损伤后神妊h胞内Cytoehromod噩Bax曩连的影响 Effectof