壳聚糖酶的制及酶法生产壳寡糖.pdf

摘要 本研究从自然界中分离筛选出一株高产壳聚糖酶的微生物菌株，经鉴定为 Jxsd一97，并 4印Prgf砌s扣卅喀4mJ。通过诱变选育，获得了菌株f4印咄讹J知‘弘m5 对其发酵产酶条件进行优化，研究确定其最适产酶培养基组分为(％，w／v)：壳聚糖 0．04，Kcl O．001， O．04，KH2P04 O．05，FeS04·7H20 1．6，蛋白胨O．4，Mgs04·7H20 接种量为O．6mL，培养时间为96h。在最适产酶培养条件下，发酵液中壳聚糖酶活力 Jxsd·97发酵液中的壳聚糖 SP．s印haroseF璃子交换层析对菌株，i妒哪乒ff淞胁瞎nms 进行了酶学性质的研究，利用薄层层析分析确认酶解产物为壳寡糖，不含氨基葡萄 糖，证明了该酶为内切壳聚糖酶。该壳聚糖酶的最适温度和最适pH分别为63℃和 壳聚糖酶有强烈的激活作用， 列的测定，为克隆表达该壳聚糖酶的基因做好了准备。 研究了壳寡糖的酶法制备条件。在pH5．8，壳聚糖浓度3％，内切壳聚糖酶加入 量5U／g壳聚糖的条件下，反应温度45℃，酶解反应时间以3小时较为合适。壳寡糖的 得率为95．9％。 研究了利用离子交换树脂来分离纯化壳寡糖。采用大孔弱酸性阳离子树脂D155 可以分离纯化寡糖：JK204阴离子交换树脂脱色效果很好。 关键词：壳聚糖酶；、发酵条件；酶解；壳寡糖：分离纯化 Abstract A stfainwith chitosanasewasisolated丘omsoil alldident砸ed hi91l activity samples thestraillmutation卸d as爿印哪fffl博归脚劬船．with wasobtained．Tbe ofIhemediumforchitosan踮e 卢m咖f螂Jxsd一97 optiIIIal∞mpositions wercas Jxsd-97 1．6， pmductionby爿置p哪f胁巧卢m增4ms follows(％，w／v)：chitosan initial peptoneO．4，MgS04‘7H200．04，KH2P040．04，KClO．05，FeS04·7H20O．001，the cIlltivationconditionsforchitosanasc pH6．O．Theoptimal pIodudionby4印erg俄啦 flask 50mL mLof Jxsd一97were250mL inoculadon， 扣埘瞎口ms containillgmedium，O．6 of 28℃alld cullivationat fof96hours．T1lechitosanase shal【ing 180rpm acti