免疫磁性纳粒子的制备及在分离cd34lt;#39;+gt;细胞中的应用.pdfVIP

l：涛|}i|l藏犬学硕．1：擎链论文 攘篓 论文题霉： 兔疫磁性纳米粒子的铡备及在分离CD34+细胞串的应庸 学科专韭： 物理纯学 学缇孛请人： 赵磊娜 指导老师： 沈鹤柏 摘 螫 基从纳米科技产生以来，纳米技本就受到了广泛的关注并褥到了迅速的发展。 其中，磁性纳米粒子因其粒径均一、比表面积大，超顺磁性等优点，受到科研入 o，t 员的青睐，程蛋囟质和固定化酶，免疫测定，RNA和DNA纯化，细胞分离和识别， 糕向给药和PCR等问题中发挥着日益重要的作用。 造盎于缭胞移植可以治疗自血瘸、淋跫瘸、多发{生骨髓癌等矗液系统恶性疾 瘸，在送学土有着重要的意义。偃是分离鹚离纯度的造血于缨胞是造蛊于缨腱移 撩的豁提步骤，成为造盘纲脆工程豹限制性嚣素。造盘干缨腿有多种细胞表滋标 志，但是鉴别造血干细胞最常用的是CD34抗原。CD34单克隆抗体可以特异性的 识另U遥血干细胞表面的CD34抗原，因此可以利用磁性纳米糍子与CD34单克隆抗 体结合形成磁性纳米粒子一抗体复合物即免疫磁性纳米粒子，在外加磁场下快速 分离氐高纯度的CD34+细胞。本文主要研究了免痰磁饿纳米粒子的制各及扶脐带 ’ 血中分离CD34+缬胞。 (1) 通过共漉淀法合成了具有超颁磁性熬￥一Fe。0。缡米粒子，在出 TritonX-100、芷己醇、环己烷构成的反楣微乳液体系中，通过正硅酸乙 酯的氨水催化水解在y—Fe。侥表面包裹了～层具有生物亲和性的二氧化 硅羼，形成了核壳型磁性纳米粒子。再通过氨基硅烷在其表面上修饰上 具有活性的氨基官能团．TEM表明磁性纳米粒子呈均匀的粒径和庭好的 荜分散健；红夕}表摄氨基已经成功修饰在磁性纳米粒子表面。氨基化的 磁性纳米粒子透过化学反应与抗体连接，形成磁性纳米粒子一抗体复合。 物，共透过了紫舞表征。磁性纳米粒子与不围熬抗体连接则可以分离不 周的细胞，为生物学上备种细胞豹分离研究提供了手段。 (2) 对硝基苯甲醛泷色测定法测定氨基量快速方便，且无毒，与其它方法比 较具有很大的优势。采用对硝基苯甲醛比色测定法可以实现磁性纳米粒 子界面的氨基定量化，对后续定量连接生物分子非常重簧；对硝基苯甲 摘要 ．』：海师范人学硕I：学术论义 醛比色测定法还帮助研究了不同反应条件下磁性纳米粒子表面界面的氨 基量，有助于优化硅烷化界面活性反应和需进一步系统地研究高性能材 料生产中反应条件的影响。‘ (3) 将磁性纳米粒子--CD34抗体复合物加入到需要分离的样品中，磁性纳米 粒子便可以与茸的细胞进行特异性结合，再用外磁场对连有磁性纳米粒 子的星昀缨胞进行阻留，从两实现分离。结果显示利周磁性纳米粒子一 抗体复合物可以快速；离效地将CD34+细胞从脐带血中分选出来，丽且分 离后CD34+细胞仍然保持正常形态、高度的增殖能力和多向分化能力，表 明磁性纳米粒子一抗体复合物分离CD34+细胞技术具有很好的效果。 关键词：磁性纳米粒子；对硝基苯甲醛比色法；氨基；CD34+细胞；CD34抗原； 造斑干／褪细胞；脐带血· 论文类型：应用基础 l：海师蔽人学颤lj学位论文 撩要 of andits cation Praparationimmunomagnefic nanoparfictesapptl inthe CD34+cel】_ separatio黜of