共振光散射术在蛋白质和核酸分析中的研究及应用.pdfVIP

秦惠：共振光散射技术在蛋白质和核酸分析中的研究及应用 摘 要 共振光散射技术是 Pastemack 等于 1993 年建立的新的分析技术，并对生物大 分子的识别、组装和聚集进行了研究，从而引起了人们的极大兴趣。 蛋白质和核酸两类生物大分子都是生命的主要基本物质，在生命活动中扮演 着重要角色。目前，关于蛋白质和核酸与有机分子之间相互作用的研究是生物大 分子研究中的一个重要领域。它对于研究蛋白质、核酸的生物化学反应，发展蛋 白质、核酸医药制品，了解抗癌药物的治疗机理，简便快速地进行体外筛选抗癌 药物，指导设计和合成新药以及对疾病的诊断，防治和合理用药均有重要的意义。 本文在查阅大量文献的基础上，选择了几种有机或抗癌药物小分子，用共振 光散射光谱法并结合吸光光度法、荧光光谱法以及核磁共振光谱法研究了他们与 蛋白质或核酸的相互作用，根据共振光散射光谱信号的改变值与蛋白质和核酸的 浓度成正比的特点，建立了几种测定纳克级蛋白质或核酸的新方法。这些方法具 有简单、快速，灵敏高和重现性好等特点，结果令人满意。 本论文分为五章。 第一章 概述了蛋白质和核酸的研究进展，共振光散射技术的原理和定量分析 基础，及其在蛋白质和核酸分析中研究与应用。 第二章 研究了钛色敏-蛋白质体系的共振散射光谱特征，并结合吸收光谱法 和一系列条件实验初步探讨了它们的作用机理，建立了一种测定纳克级蛋白质的 新方法。在 pH 4.05 的Walpole (NaAc-HCl) 缓冲溶液中，体系在 339nm 处产生最 大的共振光散射信号。在最佳实验条件下ΔIRLS 与 BSA 在 0.0-0.2 和 0.2-8.0mg/L 的浓度范围内呈线性关系，相关系数分别为 0.9992 和 0.9996，检测限为 8.3ng/mL； 与HAS 在0.0-0.4 和0.4-5.0mg/L 的浓度范围内呈线形关系，相关系数分别为0.9995 和 0.9993，检测限为 7.4ng/mL 。该方法用于人血清样中总蛋白的测定，结果令人 满意。 第三章 研究了依来铬红 B-十二烷基磺酸钠-蛋白质体系的共振散射光谱特 征，并结合吸收光谱法和一系列条件实验初步探讨了它们的作用机理，建立了一 种测定纳克级蛋白质的新方法。在 pH2.87 的Brittion-Robinson 缓冲溶液中，体系 在 563nm 处产生最大的共振光散射信号。在最佳实验条件下ΔIRLS 与 HSA 在 0.0-2.0 和2.0-8.0mg/L 的浓度范围内呈线性关系，相关系数分别为0.9997 和0.9996， 检测限为 22.6ng/mL 。与 BSA 在 0.0-3.5 和 3.5-12.5mg/L 的浓度范围内呈线性关系， 相关系数分别为 0.9992 和 0.9998，检测限为 12.0ng/mL。该方法用于人血清样和 牛奶样中总蛋白的测定，结果令人满意。 第四章 研究了五号专利兰-十六烷基三甲基溴化铵-核酸体系的共振散射光谱 特征，并结合吸收光谱法、核磁共振光谱和一系列条件实验探讨了它们的作用机 理，建立了一种测定纳克级核酸的新方法。在 pH9.9 的Brittion- Robinson 缓冲溶 液中，该体系在 345nm 处产生最大的共振光散射信号。在最佳实验条件下ΔIRLS I 秦惠：共振光散射技术在蛋白质和核酸分析中的研究及应用 与 fsDNA、ctDNA、yRNA 分别在 0-2.0、0-1.6 和 0-1.5mg/L 的浓度范围内呈线性 关系，相关系数分别为 0.9991、0.9992 和 0.9989，检测限分别为 10.2 ng/mL、 15.4ng/mL 和 14.6ng/mL。该方法用于合成样品中核酸的测定，结果令人满意。 第五章 在 pH4.55 的NaAc-HAc 缓冲溶液条件下，结合多种光谱法包括荧光 光谱法、吸收光谱法、共振光散射光谱法和核磁共振光谱法研究了抗肿瘤药物他 莫昔芬与小牛胸腺 DNA 的相互作用机理，证明了 TMX 与 ctDNA 之间是以插入 嵌合作用为主，静电作用为辅的作用模式。以