伤寒沙门菌接合质粒pRST98在动物体内外对细菌生物膜形成的影响.pdf

3 伤寒沙门菌接合性质粒pR 在动物体内外对细菌生物膜形成的影响 中文摘要 ST98 中文摘要 目的： 研究伤寒沙门菌接合性质粒pRST98在体内外对细菌生物膜 biofilm,BF）形 BF 成的影响，为预防和治疗 相关性疾病及新型抗菌药物研发提供理论和实验依 据。 方法： 一．体外实验部分 1.pR 在不同宿主菌中对生物膜形成的影响 ST98 实验菌株包括携带一长度为 100kb 毒力质粒的鼠伤寒沙门菌 Salmonella entericaserovartyphimurium,S.typhimurium）标准毒株χ3306、毒力质粒消除所得 S.typhimurium χ3337 Escherichiacoli,E.coli K W 的 突变株 、大肠埃希菌 ） 12 1485和 pR S.typhimuriumχ3337 E.coliK W 质粒 ST98经接合转移导入 和 12 1485后分别形成的 接合子χ3337/pR 和E.coliK W /pR 。按照实验室既往实验已确定的BF ST98 12 1485 ST98 形成的适宜温度和时间，将受试菌分别在96孔板和24孔板中30℃培养3d后， 结晶紫染色半定量法、扫描电镜 scanningelectronmicroscopy,SEM）和共聚焦激 光扫描显微镜 confocallaserscanningmicroscopy,CLSM）分析和比较受试菌BF 形成的情况。 2. 不同浓度IL-10对生物膜形成的影响 课题组前期研究发现伤寒沙门菌接合性质粒pRST98在动物体内外可在一定程 IL-10 IL-10 BF 度上促进 的产生。为探讨 对细菌 形成的影响，在鼠伤寒沙门菌培 1ng/ml 10ng/ml 100ng/ml IL-10 IL-10 养液中分别加入浓度为 、 和 的 ，并设不加 的对照组，30℃培养3d，用上述方法分析BF形成的差异。 二．体内实验部分 由于伤寒沙门菌具有严格的宿主专一性，只感染人，缺乏相应的动物模型。 本部分选取了与伤寒沙门菌亲缘关系非常接近的鼠伤寒沙门菌作为研究对象，在 pR BF 动物体内研究了 ST98与 形成的关系，为实时动态监测细菌在体内的播散情 I 中文摘要 伤寒沙门菌接合性质粒pR 在动物体内外对细菌生物膜形成的影响 ST98 况，本实验室前期构建了将荧光素酶报告基因lux导入并整合到细菌染色体的生 物发光菌。动物实验前首先分析了生物发光菌χ3337lux/pRST98、χ3337lux和不携带 lux χ3337/pR χ3337 BF 6-8 BALB/c 的 ST98、 的生长曲线及 形成的差异。然后将 周 小鼠皮下注射结肠癌细胞 CT26 建立荷瘤小鼠，尾静脉注射生物发光菌 S.typhimuriumχ3337lux/pRST98和χ3337lux，用感