利迪链霉菌A0高产纳他霉素工程菌的选育.pdf

lllllllllllllllJllllbllJllllllllllJlllblllllll哪 Y2550595 摘要 利迪链霉菌(Streptomyces 的一株放线菌，研究发现该菌株对多种病原真菌均有较强抑菌活性，进一步分离鉴定表 明，该菌株能够合成多烯大环内酯类抗生素纳他霉素。为提高菌株纳他霉素产量使其更 好地应用于农业病害防治中，本课题对利迪链霉菌A02进行以下三方面的研究：～是采 用基因工程手段使透明颤菌血红蛋白Ⅳm)基因在利迪链霉菌A02中得到表达，并研究 其对生长代谢的影响：二是对工程菌株AV02的发酵条件进行初步优化：三是应用基因 工程技术对利迪链霉菌A02次级代谢调控中的负调控基因进行敲除，并研究其对出发菌 株纳他霉素合成的影响。主要研究结果如下： (1)以整合有链霉菌组成型表达的强红霉素抗性基因启动子的表达载体pIBl39为出 到利迪链霉菌A02VHb基因表达菌株AV02。采用不同装瓶量摇瓶发酵，结果表明：vgb 表达可促进菌体的生长和次级代谢产物的合成。HPLC检测发酵液中纳他霉素产量比原 始菌株提高84％。 h、 (2)通过对工程菌株AV02的摇瓶发酵实验，确定了最优的发酵条件：种龄2仁30 培养温度28C、发酵初始pH值7．0、装液量10％、接种量6％、转速220rpm。并在此 培养条件下向发酵培养基中添加终浓度为0．2％的碳酸钙，0．05％的硫酸镁，其纳他霉 素产量比基础发酵培养提高了20％。 139，通过接合转移到 PCR、酶切连接将目的片段克隆到链霉菌改造后的敲除载体pKGl 株提高了一倍，最高可达6 g／L。 关键词：利迪链霉菌；纳他霉素；菌种改良：v96；接合转移；敲除 ABSTRACT in a fromthesoilofsuburban field A02，isolated vegetableBeijing，presented Streptomyceslydicus several isolationandidentificationshowed activity plantpathogenicfungi．Further sgonginhibitoryagainst macrolideantibiotic the of thatthestraincan production synthesizepolyene natamycin．Toimprove of and it in disease this S．1ydicus paper,yieldnatamycin natamycinapplywidelyagriculturalprevention，In A02Was inthe in A02and