农杆菌介导的大GmATG8c基因转化和GVGGmSARK大豆转基因愈伤组织的初步研究.pdf

摘要 摘要 大豆是全球农业重要的一种经济作物。大豆的基因组测序的完成对大豆功能 基因的研究以及大豆的种质创制研究起到了巨大的推动作用。 本实验室前期克隆了一个大豆中与细胞自噬相关的基因GmATG8c，通过模 式植物拟南芥研究发现其可能参与了低氮或缺氮胁迫下诱导的自噬作用，具有 很大的氮高效育种潜力。本文旨在通过用改进的农杆菌介导的大豆子叶节法进 行国M矿35＆?G剃粥8c的大豆转化。比较了不同大豆品种对子叶节外植体GUS 瞬时表达率的影响，其中“合丰50”的GUS瞬时表达率最高，达87．7％，更有 利于转化。利用GUS报告基因对农杆菌介导的大豆子叶节法转化体系进行了优 化，获得了具有GUS阳性表达的大豆转基因芽，为获得稳定转化的转基因大豆 提供了一种有效的转化体系，为后期获得35S：：GmATGSc转基因大豆植株提供了 基础。目前已经获得了15棵35?G，剃粥8c转化的抗性芽并嫁接成活，正在进 行分子鉴定。另外，通过用本实验室发明专利“一种快速获得大豆转基因愈伤 组织的转化方法”的方法获得了GVG：：GmSARK转基因大豆愈伤组织。用10“M DEX对G阳??G，，z脚胀转基因大豆愈伤组织诱导处理24h有较高的GmSARK h 转录本的积累；用10uMDEX对GVG：：GmSARK转基因大豆愈伤组织处理72 时可以观察到转基因愈伤组织有明显的褐化表型。该体系的建立可以用于筛选 参与大豆衰老以及由衰老引发的营养转运相关的重要基因，也为大豆衰老的研 究提供了又一实验手段。 关键词：大豆农杆菌介导转化GmATG8c转基因 Abstract Abstract isan cash worldwide．Studieson function Soybeanimportantcrop soybeangene and innovationhavebeenfacilitatedthe of soybean by completion germplasm genomesequencing． TG8cwhich Wehave cloneda GmA previouslysoybIeanautophagy·relatedgene involvein in may nitrogendeficiency—inducedautophagy．Studiestransgenic theNUE ofGmATG8c．Iintendedtoobtainstable Arabidopsissuggested potential transformedwithCaMV35S：：GmATG8e soybean by varietieswereaccessedinthis GUStransient transformation．Soybean studyby resultsshowedthat ofthe the expressionsoybeancotyledonaryexplants．The tra