动性球菌(Plnococcus sp.)NEAU--ST10--9中新型CDF家族蛋白基因cdffT的克隆及功能分析.pdf

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2015-11-01 发布于贵州
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动性球菌(Plnococcus sp.)NEAU--ST10--9中新型CDF家族蛋白基因cdffT的克隆及功能分析.pdf

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1㈣28 ——————鹜㈣Y26㈣2 鼍曼曼曼皇曼曼曼鼍曼曼曼皇曼曼皇毫曼曼曼量詈曼曼量曼曼曼量曼曼曼曼曼曼曼曼曼曼曼曼曼蔓●_一一一 1一目录中文摘要…………………………………………………………………………………………I 英文摘要………………………………………………………………………………………．．III 1前言……………………………………………………………………………………………1 1．1中度嗜盐菌简介…………………………………………………………………………．．1 1．2嗜盐微生物的盐适应机制………………………………………………………………．1 1．2．1初级钠离子泵…………………………………………………………………………2 1．2．2次级钠离子泵…………………………………………………………………………．4 1．3CDF家族的研究进展……………………………………………………………………．5 1．3．1CDF家族蛋白的结构特征……………………………………………………………6 1．3．2 CDF家族蛋白的拓扑学分析…………………………………………………………7 1．3．3 CDF家族所特有的特征序列…………………………………………………………7 1．3．4CDF家族蛋白的底物专一性和转运机制……………………………………………．8 1．3．5 CDF家族的系统发育树……………………………………………………………．．11 1．4动性球菌(Planococcus sp．)NEAU—STl0．9……………………………………………14 1．5本论文的研究目标及研究内容…………………………………………………………15 1．5．1研究目标……………………………………………………………………………．15 1．5．2研究内容……………………………………………………………………………．15 2材料与方法…………………………………………………………………………………．16 2．1动性球菌(Planococcus 6 2。1．1材料……………………………………………………………………………………………………………．．1 2．1．2方法……………………………………………………………………………………………………………．．17 2．1．3外源基因的测序及序列分析…………………………………………………………22 2．2c彬丁基因的功能研究……………………………………………………………………22 2．2．1材料……………………………………………………………………………………………………………．．22 2．2．2方法……………………………………………………………………………………………………………．．24 3结果…………………………………………………………………………………………．．27 3．1动性球菌(Planococcus 3．1．1基因组DNA的部分酶切……………………………………………………………27 3．1．2 pUCl8质粒提取及酶切………………………………………………………………27 3．1．3阳性克隆子的筛选…………………………………………………………………．28 3．1．4外源DNA的测序及序列分析………………………………………………………28 3．2Cdf仃蛋白的功能分析…………………………………………………………………．36 3．2．1 c研丁基因的亚克隆…………………………………………………………………．36 3：2．2 c瑚7基因的耐盐碱测试……………………………………………………………．．37 3．2．3 c钎r基因对二价金属离子耐受性的测定……………………………………………39