半滑舌鳎Myotatin基因通路相关基因的克隆和表达.pdf

i n基因通路 半滑舌鳎(Cynoglossussemi／aev／s)Myostat 相关基因的克隆和表达 摘要 semilaevis)是一种重要的经济鱼类，具有生长快等 半滑舌鳎(Cynoglossus 于转化生长因子13(TGF—D)家族成员。在哺乳类和其他物种中在主要在发育的 卵泡抑素，是一种富含半胱氨酸的糖基化单链多肽，它是对于包括MSTN在内 II 与ActRIIB结合形成复合体激活下游Smad传导蛋白，启动信号通路。本研究 ofcDNA 通过同源克隆和RACE(Rapidamplificationends)技术获得殿丁和 ActRIIB的全长cDNA，利用生物软件对基因进行了生物信息学的预测分析，并 借助于实时荧光定量技术对两种基因不同组织和发育时期的时空表达进行了 研究。 1、半滑舌鳎的Follistatin基因的克隆及表达分析 得到核心片段，通过RACE技术获得3’及5’末端，经拼接后得到半滑舌鳎 FSTcDNA全长1373bp，ORF为966bp，还包括16bp的5’UTR，417bp的3’ UTR。该基因编码了一个含有321个氨基酸的蛋白质前体，预测的分子量为 35．5kD，等电点为8．12，在该蛋白的N末端包含一个由31个氨基酸残基组成 的信号肽，是一种分泌型蛋白。蛋白质前体含有信号肽区域、N．端结构域、 比较分析表明半滑舌鳎FST氨基酸序列与其他物种的FST同源性较高，其结构 域I和11保守性更高，并富含保守的半胱氨酸残基。FST在半滑舌鳎10种组织 中均有表达，其中在精巢、卵巢、脾脏中表达量较高；发育时期FST表达呈 现出一定的波动性，与MSTN的表达量变化趋势相似并表现出一定的相互 作用，暗示了胚丁在早期发育中发挥了作用。 2、半滑舌鳎的ActRIIB基因的克隆及表达分析 还包括195 bp的5’UTR，325bp的3’UTR。该基因编码512个氨基酸，蛋 白质预测的分子量约为58．12KD，等电点为5．80，N末端有一个24个氨基酸 残基组成的信号肽，为跨膜蛋白。该蛋白含有明显的的丝氨酸／苏氨酸激酶激活 位点签名序列，及胞外结构域，转膜结构域，丝氨酸／苏氨酸激酶结构域等三个 重要结构域。在半滑舌鳎所有检测的10种组织中都不同程度上观察到了 ActRIIB为母源性表达，于MSTN AcvRIlB的表达，但存在表达量上的差异； 相比，在发育时期的表达低量且较为稳定。 I．statin；ActRIIB；基因克隆；半滑舌鳎 关键词： Ilyostatin；Fol I MoI e(3uarcI oni andanaI i Sof i n ng ys Myostat passthway reI ated i nHaI f-smoothSOI e genes tongue Abstra(3t Half-smooth semilaevis)isan commercial tonguesole(Cynoglossusimportant has as fish，and such in manystrongpoints fast-growing a knownasGDF me