宫颈癌不同病程织中HPV16型E2、E6、E7基因的相关研究.pdf

目 录 摘要……………………………………………………………………………………………………………………………………．．1 前言…………………………………………………………………………………………………………………………………．3 1瑚PV病毒和宫颈癌…………………………………………………………………………．．3 2 E6、E7基因序列与致癌性的关系…………………………………………………………．4 3 E6基因的选择性剪接及其产物……………………………………………………………．4 4 HPV病毒整合与宫颈癌病程………………………………………………………………．．6 5 E2、E6、E7基因的转录……………………………………………………………………．6 实验材料与方法………………………………………………………………………………………8 一实验材料……………………………………………………………………………………8 二实验方法……………………………………………………………………………………．11 1实验标本和临床资料的收集………………………………………………………………．11 2宫颈癌标本DNA／RNA的提取和质量鉴定…………………………………………………12 3构建重组质粒………………………………………………………………………………17 4宫颈癌样本中HPV的分型检测……………………………………………………………21 5宫颈癌样本中HPVl6型的E6和E7基因DNA序列检测…………………………………22 6 HPVl6型病毒基因组整合到宿主基因组的检测…………………………………………．23 7把RNA逆转录成cDNA……………………………………………………………………．25 8 E6基因剪接的检测…………………………………………………………………………26 9用cDNA检测E2、E6、E7的相对转录水平………………………………………………27 10数据处理和统计分析………………………………………………………………………29 结果与分析…………………………………………………………………………………………．．31 1 临床资料……………………………………………………………………………………31 2宫颈癌标本DNA和RNA质量鉴定………………………………………………………35 3重组质粒的构建……………………………………………………………………………．．38 4样本mⅣ分型结果…………………………………………………………………………45 5 H?V]6型E6、E7基因突变情况检测……………………………………………………．46 6 HPV]6型基因组整合到宿主基因组的检测………………………………………………51 7 RNA逆转录结果……………………………………………………………………………57 8 E6 mRNA剪接的检测………………………………………………………………………57 9用相对定量法检测E2、E6、E7基因m】卧IA水平………………………………………62 讨论……………………………………………………………………………………………………………………………………69 ，J、结……………………………………………………………………………………………………………………………………73 参考文献……………………………………………………………………………………………．．75 附勇毛……………………………………………………………………………………………………………………………………80 致谢……………………………………………………………………………………………………………………………………82 研究生简历…………………………………………………………………………………………。83 独创性声明……………………………………………………………………………………………84 学位论文版权使用授权书……………………………………………………………………………84 中国医学科学院北京协和医学院硕士研究生毕业论文 摘要 本研究选取了HPVl6型感染的宫颈癌病例样本(部分含癌旁组织)，对E6、E7 基因进行测序分析，分别构建进化树，用实时定量PCR的