小分子化合物邻连接检测技术研究.pdfVIP

摘要 对生物小分子物质如添加剂、兽药等进行快速而有效的监测有着直接而现实 的意义。本实验运用邻位连接实验并对其进行了改良，创新性地发明了竞争性免 疫磁珠亲和检测试验(CompetitiveImmunomagnetic·ProximityLigationAssay, CIPLA)，用来对生物小分子物质进行定量监测，取得了良好效果。 在临床上用来治疗呼吸系统疾病的。但随后发现其具有能量重分配作用，可以加 强脂肪分解，促进蛋白质合成，进而增加猪的瘦肉率，改善肉的品质，产生更大 的经济效益。但瘦肉精代谢缓慢，长期食用会在动物及人的组织内蓄积，当其在 人体内的积累量超过人体的毒性反应剂量时就极易引发食物中毒。因此对瘦肉精 残留的及时精确检测具有重大的现实意义。传统的检测小分子化合物的方法主要 但是由于它们灵敏度不高或特异性不好等原因，当生物组织中的小分子添加剂含 量低至一定阈值后就难以检测出来，因此发展更加灵敏的生物小分子痕量检测方 法就显得极为必要。 CIPLA技术在小分子化合物的痕量检测方面满足了上述要求。将竞争性结 合机制与邻位连接试验相结合，依赖特异的亲和探针之间产生的邻位效应，仅仅 使用一个单克隆抗体就能对小分子进行快速而精确的检测。CIPLA技术克服了 由于小分子特殊的空间结构而产生的空间位阻效应，首次实现了将邻位连接试验 运用于生物小分子的检测。 在实验中，我们分别运用抗原核酸和抗体核酸两种探针对瘦肉精进行了检 测。通过对实验条件的不断优化，对克伦特罗和莱克多巴胺均检测了5个不同数 量级的小分子浓度，最低检测限均可达到0．01 ng／ml，是ELISA检测的10-50 倍，表明了本方法极高的灵敏度和良好的动态检测范围。CIPLA技术可行性高， 适用范围广，能够运用到更多种类的小分子物质的痕量检测中，具有重要的理论 及实践意义。 关键词：生物小分子 痕量检测 竞争结合 邻位连接实验 U Abstract as and andaccuratedetectionofsmallmoleculessuch Fast pesticides，additives life． and willhave inOur infoodbiologicalsamples greatsignificance veterinarydrugs A noveldetectionmethodof smallmolecules，Competitive described and LigationAssay(CIPLA)，Wasdeveloped Immunomagnetic—Proximity inthis achievedexcellentresults． paper,which InOur twosmall assay molecules，Clenbuterol(CLE)and for andRACwereusedaSmedicines were CIPLA．CLE selected嬲targetsanalytes totreat diseasesinclinical thenres