小鼠精原细胞与母细胞miRNA差异表达及功能研究.pdf

北京协和医学院博士研究生论文 中文摘要 中文摘要 译区，进而在转录后水平发挥负调控作用。其作用形式包括介导靶mRNA降解或翻 译抑制。现己发现miRNA参与细胞周期、细胞分化及肿瘤形成等多种生物过程。 miRNA在表达上具有时空特异性，该特点使其与发育及分化过程密切相关。 精子发生是指精原细胞经过细胞增殖、减数分裂及精子细胞形成三个阶段最终 分化为单倍体成熟精子的周期性多级分化发育过程。以小鼠为例，其精原细胞首见 于出生后第6天，约2天后出现B型精原细胞，并在第10天出现前细线期精母细 胞，而圆形精子细胞的出现则需要20天，其第一波精子发生过程大约持续35天。 众所周知，发育过程涉及一系列转录及转录后的基因表达调控，而miRNA作 为新涌现出来的转录后调控因子自发现以来倍受研究学者们的关注。近年来，有关 Protein 2，Tnp2)的表达，而后者作为圆形精子细胞的一个标志物参与减数分裂后 期的染色质重塑，提示miR．122a在减数分裂后期生精细胞中发挥重要作用。最近 的研究表明miR一34c可通过增强生精细胞特异标志物的表达进而促进晚期精子发 生。 本实验室保有的两个生精细胞系GC．1 spg和GC一2spd分别代表B型精原细胞 及减数分裂前期精母细胞。两者在精子发生中可视为减数分裂前的两个连续的细胞 分化时相，准确地说两者处于由有丝分裂向减数分裂转变的过渡阶段。对其进行表 达谱分析可能有助于诠释精子发生中减数分裂的发生机制。本研究中，我们通过 time 表达下调、8个表达上调的候选miRNA。通过realPCR法验证芯片结果，我们 及miR．468。 北京协和医学院博士研究生论文 中文摘要 行靶基因预测，并通过双荧光素酶报告基因分析对预测的靶基因进行筛选，结果显 性的显著降低。 子，并通过特异性靶向各种致癌基因而与抑制细胞增殖、促进凋亡及抑制肿瘤发生 密切相关，其表达下调见于多种癌症。 Cyclin T2与CDK9 择性剪接体(CyclinT2a与CyclinT2b)，并在组织之间广泛表达。Cyclin factor b)并通 共同组成异源二聚体复合物P-TEFb(positivetranscriptionelongation 过磷酸化RNA聚合酶II(RNA polymerase (carboxyl．terminal 作用并不依赖细胞周期进程。目前，Ccnt2的功能尚不十分清楚，己明确的是其在 肌细胞分化中具有重要意义。 间存在表达上的互反关系。对Ccnt2潜在靶位点的保守性分析显示其在物种之间高 3’端的 突变体报告基因分析，结果显示miR．15a可直接调控Ccnt2且位于miR．15a 碱基配对对于其识别Ccnt2更加重要。此外，Westernblot结果显示应用miR．15a模 的表达量；进一步的拯救实验结果表明Ccnt2 抑制作用可被miR．15a 节该过程，并利用可诱导分化的小鼠成肌细胞模型C2C12进行后续研究。利用 time miR．15amimic或Ccnt2siRNA转染C2C12细胞，realPCR结果表明唯有 miR．15a mRNA