抗虫基因植物表载体构建及大豆遗传转化研究.pdf

摘要 摘要 大豆虫害严重影响了大豆的产量，因此有效防治虫害至关重要。大豆抗虫 基因工程则是防治虫害的有效途径之一。 精氨酸酶基因(LeARG2)和苏氨酸脱氨酶基因(三P四2)是番茄中的两个 抗虫基因，本研究将这两个抗虫基因构建到同一植物表达载体上。因为大豆遗 传转化周期较长，所以首先将构建好的抗虫载体通过农杆菌介导的花苞浸泡法 转入野生型拟南芥C01．0中验证其抗虫性。经过筛选得到转抗虫基因拟南芥纯合 株系。对转抗虫基因拟南芥纯合株系的表型初步观察分析表明：抗虫基因的导 入没有影响拟南芥的正常生长。下一步将进行抗虫性检测实验。 为了在叶中特异性表达抗虫基因，本研究克隆了叶特异性表达基因PRl3．J、 CA2、CRK21的启动子和终止子，并将其分别与GUS基因融合，得到表达载体 1-GUS-tCRK213．1一GUS-tPR13．1。 pGII-pCA2-GUS—tCA2、pGII—pCRK21、pGII-pPR 将上述融合基因转入野生型拟南芥C01．0，对筛选得到的转基因株系进行组织化 系的各个部位均无表达。 本实验研究了蔗糖浓度、pH值、培养基固化剂类型及浓度对大豆体细胞胚 率较高；Jack在蔗糖浓度为6％，pH7时体细胞胚诱导率较高；与其它不同条件 细胞胚诱导率均较高。 农杆菌介导的大豆体细胞胚转化中，筛选到抗性愈伤，但抗性愈伤不能再 生成苗。 关键词：大豆，抗虫，叶特异性启动子，体细胞胚发生，农杆菌介导法 Abstract Abstract Pestisoneof causesto lossof itis tofinda major yield soybean，SOnecessary to the isareliableto waypreventpest．Pest-resistantgeneticengineering way resistanceto improvesoybean pests． LeARG2andLeTD2aretwo from esculent- pest·resistancegenes Lycopersicon encode andthreoninedeaminase．Wehaveconstructed turn(tomato)whicharginase bothLeARG2andLeTD2to transformationistime soybean pGreenll0229．Because introducedtheconstructinto consuming，we wild-typeArabidopsisbyAgrobacterium —mediatedfloraltotestwhetheritconfersmore thana dip pest-resistancysignlegene． Wehaveobtainedseven tothewild homozygouslines．Comparabletypeplants，the normallnext willtestthe ofthese transgenicplantsgrowed y．The step p