拟南芥AT14蛋白的功能研究——AT14A与细胞壁的组成.pdf

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2015-11-01 发布于贵州
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扬州大学硕士论文 2．2．1．2根癌农杆菌介导法培育转基因拟南芥悬浮细胞……………………………………18 2．2．1．3缺失型突变体atl4a植株以及悬浮细胞鉴定与培育………………………………19 2．2．1．4转基因株系GFP荧光定位研究……………………………………………………．．19 9 2．2．2细胞壁多糖组分测定………………………………………………………………………。l 2．2．2．1纤维素含量的测定……………………………………………………………………19 et 9 葸酮法(Schricka1．，2004)……………………………………………………………………l 2．2．2．2果胶含量的测定………………………………………………………………………21 咔唑比色法(朴一龙等，2006：丁建东等，2010)…………………………………………21 2．2．2．3 B．葡聚糖的测定………………………………………………………………………。22 苯酚硫酸法(陈玲玲等，2011)………………………………………………………………22 2．2．3壁蛋白的提取及分析…………………………………………………………………………22 2．2．3．1拟南芥壁蛋自的提取…………………………………………………………………22 2．2．3．2蛋白含量的测定及壁蛋白纯度的鉴定………………………………………………23 2．2．3．3双向电泳………………………………………………………………………………24 2．2．3．3．1溶液配制………………………………………………………………………24 2．2．3．3．2蛋白样品预处理………………………………………………………………．25 2．2．3．3．3第一向固相pH等电聚焦………………………………………………………26 2．2．3．3．4第二向SDS．PAGE……………………………………………………………27 2．2．3．3．5考马斯亮蓝染色………………………………………………………………．．28 2．2．3．3．6胶的保存………………………………………………………………………．28 2．2．3．3．7质谱鉴定差异蛋白质…………………………………………………………28 2．2．3．3．8 2．2．3．3．9搜索数据库分析差异蛋白质…………………………………………………29 2．2．4与ATl4A互作的细胞壁相关蛋白分析……………………………………………………．29 2．2．4．2eDNA文库筛选流程…………………………………………………………………．29 2．2．4．5 cDNA文库筛选………………………………………………………………………30 第三章实验结果与分析……………………………………………………………………………………。32 3．1拟南芥ATl4A相关基因型植物材料体系的建立…………………………………………………32 3．1．4缺失型突变体atl4a植株鉴定………………………………………………………………34 3．1．5转ATl4A—GFP融合基因植株叶表皮荧光观察……………………………………………35 3．2拟南芥ATl4A相关基因型株系细胞壁多糖组分测定……………………………………………36 3．2．1纤维素含量…………………………………………………………………………………．．36 3．2．2果胶类物质含量……………………………………………………………………………。37 3．2．3葡聚糖含量……