条纹斑竹鲨和鲫BAFF基因的克隆和性质分析.pdfVIP

摘要 条纹斑竹鲨和鲫鱼BAFF基因的 克隆和性质分析 庞书英 南京师范大学生命科学学院，南京210046 摘要 本论文共分为4个部分： 1．综述近年来B淋巴细胞刺激因子(BAFF)的研究进展。 2．探讨鱼类BAFF基因研究的意义。 3．通过RT-PCR和RACE技术，从条纹斑竹鲨鱼(Chiloscylliumplagiosum)脾脏 一个跨膜区和一个弗林酶切位点。CpBAFF与其它已知的硬骨鱼类斑马鱼、大西 洋鲑鱼、斑点绿河豚、三刺鱼、彩虹胡瓜鱼和虹鳟鱼在氨基酸水平上的相似性分 time 别为36％，40％，43％，45％，47％和57％。RealPCR实验表明BAFF主 要存在于条纹斑竹鲨的免疫器官脾脏和肾脏中。在大肠杆菌BL21(DE3)qb高效 表达了带有His6标签的重组可溶性CpsBAFF，并对其进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 2+．IMAC纯化后，在体外可刺激 及免疫转印检测鉴定。目的蛋白CpsBAFF经Ni B细胞存活，并呈剂量依赖性。CpBAFF是从软骨鱼中获得的第一个BAFF分子， 而且是目前克隆到的最原始的BAFF基因，这对研究脊椎动物免疫因子的进化有 着重要意义。 aurams)脾脏组织中扩增得到 4．通过RT-PCR和RACE技术，从鲫鱼(Carassius cDNA全长1639 B淋巴细胞刺激因子的全长cDNA序列(CaBAFF)。CaBAFFbp， 包括408 bp的3端非编码区和795bp的开放读码框(编 bp的5端非编码区、438 码242个氨基酸)。与已知其它BAFF一样，其氨基酸序列中也含有一个跨膜区 和n盯结构域。Blast分析表明，CaBAFF与斑马鱼、彩虹胡瓜鱼、大西洋鲑鱼、 虹鳟鱼和斑点绿河豚分别有77％、66％、59％、59％和47％的氨基酸序列同源性。 同时利用分子生物学软件分析了鲫鱼CaBAFF蛋白质的基本性质。本实验为继 续研究BAFF基因在鲫鱼中的生物学功能及与免疫的关系奠定了基础。 ’ plagi。s“聊)，鲫鱼(c口r口ssz“s口“加加)’ 关键词：条纹斑竹鲨(劬f，。soylli“m BAFF，克隆，体外表达，生物信息 Abstract ofBAFFfrom andcharacterization Cloning gene catsharkandcrucian whitespotted crap ShuyingPang ofLife Normal 210046 University，Nanj CollegeSciences，Nanjing ing Abstract four Thisthesiscontains