棕色棉纤维原花素转运蛋白基因GhTT12的克隆与表达分析.pdfVIP

㈣㈣㈣㈥㈣ 摘要 Y2753804 棕色棉属于棉属陆地棉，是一种纤维本身就具有天然色彩的棉花，在后期加工过 程中无需染料印染，能有效减少对环境的污染，降低生产成本。但棕色棉纤维颜色单 一、着色不均匀、色牢度和色饱和度低等问题在很大程度上限制了其利用和发展。由 于棉纤维属于种皮特化的细胞，而一般认为种皮的色素是由原花青素氧化形成的，故 推断原花青素可能是构成棕色棉纤维色素的一种成分。现有研究表明，TTl2是MATE 家族的多药次生类转运蛋白，其功能是在原花青素代谢途径中将原花青素前体物质糖 基化的表儿茶素通过反向运输的方式转运进液泡中，同时将H+排出液泡。因此研究棕 色棉纤维刑2基因的功能，可以为利用基因工程技术对棕色棉色彩性状进行遗传改良 提供了参考依据。 本研究根据不同物种刚2同源基因的氨基酸序列的保守区域设计引物，结合 棉纤维发育的不同阶段研究其表达水平与原花青素积累的关系。构建原核表达载体在 大肠杆菌中对GhTTl2进行诱导表达。构建真核表达载体对GhTTl2进行亚细胞定位。 主要结果如下： (1)通过同源基因克隆的方法从棕色棉纤维中获得了一+个聊2基因的全长cDNA， 命名为Ghl712(Genbank登录号：KF240564)。该序列长1733 bp，包含一个1503 bp (2)氨基酸序列比较结果显示GhTTl2与多个物种刚2基因编码的氨基酸序列具有 较高的同源性，说明聊2基因在进化过程中较为保守。系统进化树表明GhTTl2 与可可TcTTl2具有最高的同源性，达到85．17％。 (3)棕色棉纤维中可溶性原花青素和不可溶性原花青素的含量都是先上升后下降，且 5 在花后ld左右达到高峰期，而棕色棉纤维的原花青素含量在整个发育时期都远 棉纤维不同发育时期的表达量显著高于白色棉，最高达到6倍左右，且随着纤维 的发育，G矗刚?基因的表达量逐渐降低。说明G矗聊2基因可能与稼色棉纤维 色素的形成相关，且原花青素可能是棕色棉纤维色素的组成成分。 度、不同诱导时间、不同诱导温度条件下诱导GhTTl2基因的表达，但均未能获 得理想的结果，可能是由于GhTTl2跨膜蛋白的疏水性结构过多，导致其在大肠 杆菌中无法表达或表达过弱。成功构建了真核表达载体pCambial304． 万方数据 中，使用抗生素筛选出1株抗性植株。 关键词：棕色棉，GhTTl2基因，原花青素，亚细胞定位，遗传转化 H 万方数据 Abstract hirsutumL．witha colorful it Browncotton to naturally fiber，SO belongsGossypium dosenotneedto and in ismorefriendliertoenvironment printdyepostprocessing，which costthanatraditionalwhitecotton．Neverthelesssuch as andlower problems production saturationrestrictit’S less colorfastnessandlowcolor beingcolor,unevencoloring，low