氟暴露致体外培PC12细胞损伤机理的研究.pdfVIP

Dissertationfor Master on Mechanismof 1 Study CulturedPC2Cells Damage toFluorosis Exposed A Dissertationin Zoology Underthe ofProfessor Supervision Zi-guiZhang By Normal Zhejiang University iang，China Jinhua，Zhej 14 May，20 万方数据 氟暴露致体外培养PCI2细胞损伤机理的研究 摘要 氟广泛分布于自然界，是一种人体必需的微量元素，但长期过量摄入，可在体内 蓄积，引起地方性氟中毒，严重损害机体的骨相和非骨相器官。其损伤可能与氟引发 的氧化应激有关，但具体机制仍不明了。细胞凋亡或许是其中的关键一环。近年来， 内质网应激所引起的细胞凋亡，已经成为人们研究氟致机体损伤的热点。然而其侧重 点多是关于内质网应激在氟致骨相器官损伤方面的研究，而在非骨相器官上研究较 少，并且传统的氧化应激检测指标如SOD、MDA等，由于其测定方法受多种因素影 响，不仅特异性与敏感性均较低，且所得结果也互有差异或相互矛盾。本研究采用直 接测定神经细胞内ROS浓度变化的方法，对进一步探讨氟致神经细胞损伤作用的分 子机理有十分重要的意义。 PCI2细胞来源于大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤，可在神经生长因子(nervegrowth factor，NGF)诱导下增殖和分化为有交感神经元特性的细胞，广泛用于神经系统疾 123和JC．1 后，用DCF标记检测细胞内活性氧的水平；氟暴露8h后，用Rhodamine 24h后，用倒置显微镜观察细胞形态变化，应用westernblot方法检测凋亡相关蛋白 PAI冲、P．elF和内质网应激相关蛋白XBP．1表达情况。 实验结果如下： 1．细胞活性检测结果：与对照组相比，染氟2h后，2．0mM组细胞存活率显著下 h后， 降(尸0．05)；染氟4 1．5和2．0mM组细胞存活率显著或极显著降低俨0．05或 万方数据 存活率极显著降低俨0．01)： 2．细胞形态观察结果：正常细胞呈长梭形，有2到多个突起，染氟24h后，随着染 氟浓度的增加，细胞密度逐渐降低，部分细胞开始变圆，凋亡／死亡细胞数量增多， 甚至可以看到明显的凋亡小泡和细胞碎片。 3．细胞内活性氧水平检测结果：细胞暴露于NaF2h后，随着染氟浓度增加，细 胞内活性氧浓度逐渐升高．与对照组相比，1．5mM组和2．0mM活