炭疽芽胞杆菌BlA蛋白粘附功能研究.pdfVIP

摘要 摘 要 炭疽病是由炭疽芽胞杆菌(Bacillus 通过皮肤、呼吸道和消化道感染动物和人，严重危害人类和家畜的生命健康。大量研究 表明，单一的PA组分疫苗并不能够提供完全的免疫保护，以PA为主，辅以其它来自菌 体或芽胞的保护性组份是一个比较理想的炭疽疫苗研究策略，因此研究者一直致力于寻 找和鉴定新的炭疽芽胞杆菌保护性抗原。 炭疽芽孢杆菌的细胞外膜由一层二维晶状结构S层蛋白包裹，其生物学功能主要是 作为保护性的外膜、分子泵和细菌粘附等。BslA蛋白(且anthracisA)由炭 S-layerprotein 菌致病过程中起着重要作用。本研究拟对BslA蛋白功能及其核心结构域方面进行研究， 具体如下： 第一部分工作利用PCR的技术扩增bslA基因片段，进行原核表达载体构建、重组蛋 白分离纯化、多克隆抗体制备，并且通过流式细胞、细菌粘附抑制实验、免疫荧光等实 Purification ／Rosetta((DE3)并对BslA实现了可溶性表达。通过ProBondTM system得到纯度 菌粘附抑制实验计算出BslA重组蛋白及其抗血清能够抑制约为98％的炭疽杆菌黏附， 表明BslA蛋白可能是一种潜在的保护性抗原。 第二部分工作中，本实验通过蛋白结构预测软件，确定核心功能结构域可能存在的 位置，从而进行分段研究。为了更好、更方便的检测，我们将蛋白片段与EGFP蛋白融 合表达，使EGFP成为标签。再通过免疫荧光等方法检测BslA蛋白片段功能。结果表明， 分析和流式细胞检测结果表明，构建的EGFP蛋白有很好的荧光性。另外，根据蛋白结 炭疽芽胞杆菌BslA蛋白粘附功能研究 1—500 1 —BslA．(4 位于431．455位点。 综上，BslA是一种重要的保护性抗原，可能在新一代炭疽疫苗的研究和开发中扮 演重要的角色。BslA蛋白是具有细胞粘附功能，其核心功能结构域的确定为进一步研究 炭疽芽胞杆菌的致病机制与免疫预防打下了良好的基础。 关键词：炭疽芽胞杆菌，BslA蛋白，免疫荧光，粘附、EGFP蛋白 Il Abstract Abstract Bacillus the causativeofanthraxin anthracis，is agent humansand infectionOccurswhen enterthe abrasionsin endosporesbodythrough theskinor or by ingestion researchesshowthat PA vaccinecail’t inhalation．Many separateprotein provideenough researchers considerthatPA otherb