白细胞介素4及受体生物传感体系的构建及药物活性评价应用.pdfVIP

中文摘要 中文摘要 压电生物传感器作为一种新型的分析手段，因其较低的检测下限、简单的 操作步骤、低廉的成本等优势，已被广泛应用在了临床、环境、食品等领域。 其表面敏感膜的制备，是压电生物传感器构建的关键步骤。本文致力于白细胞 介素4．白细胞介素4受体(IL_4．slL-4R)的生物传感体系的构建，并将其应用于 药物活性评价中。主要内容如下： (1)利用石英晶体微天平(QCM)构建了两种基于白细胞介素4．白细胞介素4受 体的生物传感体系，实现了对slL．4R与IL_4特异性结合反应的实时监控。 利用a．硫辛酸自组装膜技术将sIL-4R固定在石英晶体金电极的表面，构建 了基于slL．4R的亲和型生物传感活性界面。实验结果表明：此方法能够较为有 效地将sIL．4R固定在金表面，固定的slL-4R可以和IL．4发生特异性、浓度依赖 性的结合反应。10 ng， mg·L。1是slL-4R的最佳固定浓度，其固定量可达112．46 加入10 ng的质量变化，RSD分别为3．90％和4．86 mgL。1的IL-4后可引起62．96 ％，说明实验可信度较好。本文同时利用QCM实时监测了slL．4R与IL_4之间 的特异性作用过程，并对其进行动力学分析，得到其解离平衡常数KD为1．42x10‘8 M。 利用生物素．亲和素的强结合作用，将生物素衍生化的slL．4R固定于石英晶 体金电极表面，构建了基于slL-4R的亲和型生物传感活性界面。实验结果表明： 此方法能更有效的将slL．4R固定在金表面，固定的slL-4R可与IL．4发生特异性 的、浓度依赖型的结合反应。15 mg·L-1是slL-4R的最佳固定浓度，其固定量可 达147．19 ng的质量变化，RSD分别 ng，加入10mg·L．1的IL．4后可引起97．1l 为4．98％和4．25％，说明实验可信度较好。利用QCM实时监测其反应过程，得 10一M。 到解离平衡常数KD为1．38x (2)将白细胞介素4．白细胞介素4受体生物传感体系应用在药物活性评价中， 并初步验证了此方法在药物活性评价中的可行性。 本文分别对两种生物传感体系进行了对比，并对slL．4R拮抗剂进行拮抗活 性研究，发现两种生物传感体系均能够较好的评价其药物活性，并得出4’，7．二 甲氧基异黄酮的拮抗率为30％左右，而硫藤黄菌素拮抗活性为5％。 对传感器敏感表面的再生及使用寿命进行的研究表明IL-4结合至表面后可 中文摘要 用0．08M的尿素洗脱其与sIL．4R的结合，再生得到slL．4R包被的样品池表面， 重复再生6次以内的界面其结合活性能保持90％以上。且金基片表面固定的 用3次。 关键词：生物传感器 白细胞介素4药物活性评价4’，7．二甲氧基异黄酮 Abstract Abstract new to Asa their suchaSlowdetection method，due analytical manyadvantages freemeasurementsand biosensorshavebeen limit，label cheapprice，piezoelectric usedinclinical detectionandfood wildly research,environmentindustry．The fabricationof