玉米WRKY基启动子的克隆与功能分析.pdfVIP

摘要 启动子是基因表达调控重要的元件，启动子的活性间接反映了它所控制的基 因表达。组织特异性启动子作为启动子的一种，可以启动外源基因在受体植物的 特定组织器官中高效表达，减少不必要的浪费。WRKY基因家族是在植物中起特 异作用的一类转录调控因子，它被证明了参与植物的抗病反应，还影响植物的衰 老、抗胁迫以及生长和发育。 本实验克隆了一个玉米WRKY基因的启动子，采用GUS 报告基因对WRKY 基因的启动子功能进行了分析，通过启动子的删减实验，水稻的遗传转化及组织 的GUS染色，取得如下结果： 1、根据网上预测的WRKY基因设计引物，从玉米(玉米品种B73)中扩增了该基 因的启动子部分，命名为P2880，在启动子顺式作用元件预测网站上分析该启动 子序列，预测到存在TATA 盒 、CAAT 盒和GATA 盒等多个作用元件。 2、克隆出WRKY基因上游的启动子并且克隆了4个5’端缺失启动子，5个启 动子的长度依次为2880bp、1812bp、1254bp、680bp和355bp。将5个启动子与 含有GUS报告基因的质粒pCAMBIA 1301连接并构建了pCAM2880GUS和4 个5’端缺失启动子载体，将缺失载体分别命名为pCAM1812GUS、 pCAM1254GUS、pCAM680GUS 和pCAM355GUS。 3、用农杆菌介导法将所有植物表达载体转化水稻，获得了37棵转基因植株。由 实验结果可知，pCAM2880GUS载体对应的转基因植株愈伤组织染色结果为蓝 色，而pCAM1812GUS、pCAM1254GUS、pCAM680GUS、pCAM355GUS 载体 对应的转基因植株的愈伤组织均未染上蓝色，由此可知P2880启动子的核心区域 位于转录起始位点前2880bp至1812bp之间。 综上所述，本研究克隆了一个玉米WRKY基因启动子，并发现该启动子是 一个愈伤特异性启动子，而目前WRKY基因未有愈伤组织表达特异性的报道， 该启动子的克隆对玉米相关基因功能研究具有重要的意义。 关键词：玉米，启动子，水稻遗传转化，GUS染色，愈伤组织特异性 -I- Abstract Promoters are important factors that regulated gene expression. The activity of promoters indirectly reflect gene expression that they control. As one kind of promoter, tissue-specific promoters could drive stable and effective expression of target gene in specific tissues of plants. As a result, wastes are reduced. WRKYgene family is a type of transcriptional regulatory factors which has specific functions in plants. Plant WRKYgene-encoded transcriptional regulators appear to be involved in various physiological programs, including disease-resistance, senescence, stress responses of biotic andabiotic, growth anddevelopment processes. We clones a WRKYgene promoter in Zea Maize, and analyse the functions with GUS reporter gene. Through the promoter reduction experiment, rice genetic transformationandGUSstaining,we get the acheievements asbelow: 1. A 2880bp promoter fragment of WRKY gene is amplified by poly