玉米PABS基启动子的克隆与功能分析.pdfVIP

摘 要 启动子是直接调控基因特异性表达的重要元件， 它驱动基因的表达决定了基 因表达的强度、时间和空间等特异性。组织特异启动子作为一类专一性启动子， 能指导外源基因在植物发育过程中某一特定时空表达， 它能使目的基因的表达产 物在一定空间积累，增加区域表达量，避免了植物营养的浪费。因此，寻找专一 性启动子，使外源基因特异、高效的表达已成为植物基因工程的关键环节。花粉 特异性启动子可以通过驱动能干扰花粉产生或生存能力的基因而导致雄性不育， 或在花粉粒中特异性表达目的基因， 所以研究玉米的花粉特异性启动子具有一定 的意义。 本研究构建了 ZMP5启动子的 5个水稻缺失转化载体， 然后通过农杆菌转化 法将构建的载体转入水稻中， 对获得的再生植株进行PCR鉴定和GUS染色分析， 具体研究结果如下： （1）根据文献中已发表的拟南芥 PAB5 基因的蛋白序列，经过蛋白比对获 得玉米的 PAB5基因的蛋白序列，获得该基因的DNA序列。 （2）用 PLACE  数据库对分离的序列进行元件分析后发现，该序列除含有  TATA­box、CAAT­box等启动子具有的一般元件外，还含有与花粉特异性表达相 关的元件:AGAAA 元件(3 个)和 PolyA­S3 元件(1 个)，推测其可能是花粉特异性 启动子。 （3）为了验证 ZMP5 启动子的调控特性，对 ZMP5 启动子进行了 5′端缺失 分析,  与 GUS 基因融合构建了 5 个 5‘端缺失载体，分别命名为 pCam­ZMP5p、  p1706、p1198、p777 和 p365。 （4） 分别的植物表达载体 ZMP5p 通过农杆菌转化技术， 获得了转基因植株。 对转基因植株 PCR 检测，得到阳性植株，转化率达到 71.4%以上。GUS 组织检 测，证明 ZMP5 启动子可驱动 GUS 基因在水稻的花粉中表达，在其他组织中不 表达。 本文分离的玉米 PAB5花粉特异性启动子是首次报道，研究得到的启动子资 源可以有效地在植物的转基因育种中加以利用，更有效、更有针对性地表达外源 基因，解决转基因育种中的安全性问题，可以在转基因育种得到应用。 关键词： 玉米，PAB5基因，花粉特异性，启动子，农杆菌转化技术 I  Abstract  Promoter is the most important element for controlling gene expression; it could  drive gene expression in  special time, tissues  and decide the level  of  expression.  Tissue­specific  promoter,  a  class  of  the  most  useful  promoters,  can  drive  gene  expression in particular space and time. They can increase transgenic expression in  specific  organs  or  developmental  stages,  and  avoid  unnecessary  energy  waste.  Therefore, the isolation,  identification  and application  of  specific promoters have  become a key  aspect  in transgenic plant researches. Pollen­specific promoter can  interfere with pollen production or viability of the gene and lead to infertility, or in the  target  gene  specifically  expressed  in  pollen,  so  these  of  maize  pollen­specific  promoter has certain signif