盐酸昌欣沙星抑HERG钾离子通道分子机制的研究.pdfVIP

中文摘要 中文摘要 如三RG(hman related e吐财a-go—go gene)基因最初发现于人脑的海马组织，编 of rectifier 码延迟整流钾通道快速成分(rapidcomponentdelayed potassiumc11aIlIlel， 中发挥重要作用。研究表明，舵RG突变是2型遗传性长QT综合征(10ngQT 得性LQTS的主要原因。严重时二者均可引起心肌动作电位复极化时程延长，诱发心 de 律失常，如尖端扭转型室性心动过速(T0rSades po血es，Tdp)，以体表心电图QT 间期延长，发作性晕厥或心源性猝死为典型临床症状。卸三RG钾通道能被多种药物阻 断是由其特殊的分子结构决定的。HERG钾通道与其他钾通道相比，内腔较大，易被 一些药物结合，且内腔中的一些氨基酸，如研652，Phe656与多种药物高度亲和， 抑制梳。目前已知能够通过阻断}玎巳RG钾离子通道引起LQTS的药物有心血管系 统药物以及多种非心血管系统药物，如抗疟疾药、抗组胺类药、和抗肿瘤药、肌肉松 弛剂，抗生素和抗菌剂等都可通过与印三RG钾通道内腔氨基酸结合，不同程度地抑 制概，诱发心律失常。因此，近年来在新药研发过程中，药物对历ERG的阻断作用 就成为药物研发过程中心脏安全评价的重要指标之一，精确理解药物阻断作用的分子 机制则成为临床工作者和基础研究人员关注的焦点问题。 氟喹诺酮类抗菌药是广泛用于感染性疾病的第三代喹诺酮类抗菌药。因其口服易 吸收，抗茵活性强而在临床上广泛应用。然而，近年来随着这类药物临床应用面的扩 大，因几种氟喹诺酮类抗菌药物抑制脏RG而使心肌复极化3期时程延长，进而导 致体表心电图QT间期延长，诱发获得性LQTS的报道不断公诸于世。例如，氟喹诺 可以显著引起QT间期延长，心肌细胞动作电位时程的延长，而被退出市场，因为相 国自主创新、开发研制的第三代氟喹诺酮类抗菌药，其对梳的作用尚不清楚。因 此本文的问题是：CFX，是否与其他氟喹诺酮类药物一样，对妇RG有抑制作用，如 课题通过下述三个部分回答这些问题： 首先以体外瞬时表达髓RG钾离子通道的皿K293细胞为研究对象，利用全细 胞膜片钳记录技术，观察cFX对硼三RG钾离子通道的影响，并以CFX的改造前体， 中文摘要 示CFX以浓度，电压和时间依赖的方式抑制如啪，且主要作用于通道的开放状态。 但是CFX抑制}玎三RG尾电流的半有效浓度(JG产162．1 pM)是其修饰前体MOX 心脏毒性减弱。药物引起LQTS的因素很复杂，除了药物作用于通道本身外，当病人 患有代谢性疾病、电解质紊乱等，均可以增加患者对药物的敏感性，使药物诱发LQTS 的可能性增加。本实验中也观察到，当细胞外液钾离子浓度无论增高或降低时，与正 常细胞外液相比，同一浓度的CⅨ对如啪显示更强的抑制作用，这提示胞外钾离 子浓度异常可增加通道对药物的敏感性。 ’其次为了研究药物与通道蛋白之间相互作用的分子机制，本课题采用了计算模拟 的方法对髓RG钾离子通道蛋白进行同源蛋白三维结构建模以及与药物小分子进行 分子对接，研究CFX与印三RG钾通道蛋白结合的分子机制。结果显示：新型氟喹诺 和G1y648，以与Ser624的羟基氧之间的氢键作用最强。 最后，用分子生物学实验的方法把与CFX相互作用较强的几个氨基酸位点突变 后，观察CFx对这些突变体的影响，实验结果显示除了突变体G648A的电流记录不 到以外，500“M 点主要集中在这几个氨基酸上，尤以与S624位点的作用最强。因此在今后该类药物 些氨基酸的作用大小。 关键词：瑚三RG，氟喹诺酮，盐酸昌欣沙星，全细胞膜片钳技术，计算机模拟 Ⅱ AbS廿act A