谷氨酸棒杆菌麦寡糖基海藻糖水解酶基因的克隆和表达.pdfVIP

摘 要 海藻糖分子是由两个吡喃葡萄糖环以a,a-I，1．糖苷键连接而成的一种十分稳定的非还原二糖， 它广泛存在于自然界的很多生物体内。海藻糖作为一种天然的非特异性生物保护物质，能够保护 生物细胞和生物活性物质抵抗脱水、冷冻、高温、高渗、干旱、氧化、辐射乃至有毒化合物等不 良环境。海藻糖已经被应用到医药、化妆品、食品等多个领域，有很好的市场前景。 目前，海藻糖的生产方法以生物酶法制备为主。其中，利用TreS途径由麦芽糖生产海藻糖 的TreZ蛋白，即麦芽寡糖基海藻糖水解酶(MTHaSe)的基因克隆和异源表达进行研究。 首先经PCR克隆到谷氨酸棒杆菌ATCCl3032 其插入大肠杆菌表达质粒pRSET-B，在宿主菌E．coli 异表达的目的蛋白。优化诱导条件后，溶解表达的目的蛋白约占胞内可溶总蛋白的40％，每毫升 发酵液可以表达可溶目的蛋白0．27mg，仍有部分目的蛋白聚集形成包涵体。经薄层层析和离子色 谱检测证实，该目的蛋白与谷氨酸棒杆菌麦芽寡糖基海藻糖合成酶(MTSase)共同作用于糊精后， 可以产生海藻糖，具有MZnase的相应活性。 能否在毕赤酵母和枯草芽孢杆菌中分泌表达。尝试不同诱导条件后，在重组毕赤酵母和重组枯草 芽孢杆菌的诱导培养基上清液中没有观察到