丙烯酰胺对小鼠丸细胞毒性作用及其与波形蛋白表达关系的研究.pdfVIP

¨医科人学硕l：学化沦j[ 丙烯酰胺对小鼠睾丸细胞毒性作用及其 与波形蛋白表达关系的研究 摘要 实验目的研究腹腔注射、灌胃、皮肤染毒丙烯酰胺(AA)对小鼠睾丸细胞损伤的影 响；建立AA染毒小鼠模型，研究AA致雄性小鼠睾丸细胞凋亡作用及对波形蛋白表达的影 响，进而研究波形蛋白表达与生精细胞凋亡的关系；探讨AA致雄性生殖毒性作用的靶细胞， 为AA生殖毒性机制研究提供实验室依据。 实验内容与方法 第一部分 将48只5周龄清洁级健康雄性昆明种小鼠随机分为4组，分别为空白对 照组、腹腔染毒组、灌胃染毒组和皮肤染毒组，每组12只。染毒剂量为25 mg／l(g，连续 染毒5d，每天1次。观察染毒前后体重变化和睾丸系数。于首次染毒后第6天行单细胞 凝胶电泳实验，第19天行睾丸早期精细胞微核实验。 第二部分 将7～8周龄40只清洁级健康雄性昆明种小鼠随机分为4组，每组10 mg／l(g 给予等体积蒸馏水，即正常对照组。于首次染毒AA后第36天处死小鼠，采用组织病理 分别从组织学水平，细胞水平，DNA水平，蛋白水平及mRNA水平，分析AA致睾丸细 胞凋亡及其与波形蛋白表达的关系。 实验结果 1．腹腔染毒组和灌胃染毒组小鼠体重均显著减少(尸O．01)。三种染毒方式小鼠的 睾丸重量及睾丸系数均较对照组明显降低(尸0．05或尸0．01)。与空白对照组比较，各 矩均较高，差异均有统计学差异(尸O．05或P0．01)。 而与空白对照组比较，睾丸系数差异没有统计学意义(尸O．05)。灌胃染毒组早期精细 胞微核率显著高于空白对照组(P0．05)，而腹腔染毒组和皮肤染毒组早期精细胞微核 率虽高于空白对照组，但差异无统计学意义(PO．05)。 3．HE染色结果显示：10 mg／l(g组与正常对照组比较，小鼠睾丸曲细精管排列基本规 则，各级生精细胞未见明显改变。20 mg／I(g和40mg／l(g剂量组小鼠，曲细精管排列不规 II 蛐医科人学硕1．学{讧论文 则，生精上皮层次减少，各级生精细胞减少，管腔内成熟精子减少，且有空泡形成。 4．FCM结果显示，与对照组相比，各剂量染毒组的1C细胞明显减少，2C细胞的比 例显著提高(P0．01)，且10mg／l(g和20mg瓜g剂量组1C和2C细胞的比例差异无统计学 意义(尸0．05)。10 mg／l(g和20m眺g剂量组4C细胞的比例较对照组增加，40mg／l(g 组4C细胞的比例低于前两组，但仍高于对照组，且均有统计学意义(PO．01)。各染 学差异(尸0．05)。4C：2C仅在40 mg／l(g剂量组与对照组比较减少有统计学差异(P 0．01)。 5．TUNEL法的检测结果表明，各剂量组的细胞凋亡指数显著高于正常对照组(P O．051。 明显降低(P0．05)。 结论 1．在本实验条件下，三种方式染毒AA均可致雄性小鼠睾丸细胞产生DNA损 伤，使小鼠睾丸早期精细胞微核发生率升高，且以灌胃染毒方式产生的毒性作用最为敏感； 2．AA诱导可使小鼠睾丸曲细精管各级生精细胞减少，管腔内成熟精子减少。3．AA可以 降低精原细胞转化为精子的效能，使精子细胞和精子数量减少，使生精过程发生障碍。其 致细胞凋亡作用的靶细胞可能是精原细胞。4．AA诱导可使生精上皮凋亡指数增加，且有 剂量依赖性。 5．AA使得波形蛋白及mRNA的表达显著减少，且主要是间质细胞中的波 形蛋白表达减少。推测AA生殖毒性作用的可能机制为AA染毒使波形蛋白训刚A表达 减少，从而导致波形蛋白生成减少。 6．AA致睾丸生精