双荧光T-RFP方法的建立及应用.pdfVIP

中文摘要 摘 要 微生物多样性是生物评价的重要指标之一。应用分子生物学的研究方法可以 快速准确地获得微生物多样性信息。本论文在末端限制性片段长度多态性分析 (T．1心LP)方法的基础上，建立了双荧光标记的T．RFLP技术，并将其应用于 大凌河地区11个底泥样品的分析中，从而对大凌河流域的环境状况做出了初步 的生物评价。 论文首先对双荧光T．I心LP技术检测的准确性及灵敏性进行了分析，结果表 明，与传统T．RFLP基本一致或优于。进一步优化了分析参数的设置，使双荧光 T．RFLP检测的灵敏度达到样品中某菌群的数量大于50时即可被有效检出。 应用双荧光标记T．I疆LP技术对辽宁省大凌河区域的11个底泥样品进行了 分析，获得如下结果： 样点相比，对下游各样点(D5．D9)的微生物群落组成影响更大。另外枯水期(2011 年5月)与丰水期(2010年8月)相比，地理位置接近的样点具有更高的相似 性。 指数和P撕ck丰富度指数的综合分析表明，大凌河11个采样点的底泥样品多样 性指数均大于2，均匀度指数均大于0．9，细菌丰富度较高，且物种多样性相对 稳定。 3．主成分PCA分析表明，环境因子中溶氧值(DO)及pH值对大凌河流域 底泥样品微生物多样性指数的影响最大。 4．对大凌河流域11个底泥样品的优势菌种分析表明，普遍存在的菌种为芽 孢杆菌属(助c，胁)及梭菌属(a西删协“朋)：而在排污口附近样点，优势菌种 多为与硫氧化还原反应相关的菌属，如脱硫弧菌属(腑“帕vf6rfD)、产碱杆菌 属(彳，c口，f98eJ)和硫杆菌属(彳cf‘办，^fD6口cf朋姗)等。 关键词：双荧光标记卜RFLP；细菌群落；大凌河；多样性分析 ABSTRACT isone ofthe Microbi鲥diVerSity importantindicators in evaluation． biological of moleculaf The印pIication metllods biology call afast pr0Videand accurate access t0 this microbi司diVerSit)，·In study，an improveddouble fluorescence 1abeling ‘e姗iml硒鲫enllength pol，rrllorphism(T·RFLP)tecⅢquew嬲es讪lishedand w≤ in subsequentlyappliedmicrobial of diVerSity觚aly