家蚕s3α基因克隆、亚细胞定位及功能研究.pdfVIP

参 摘 要 morinuclear 家蚕核型多角体病毒(nombyx polyhedrosis 毒史上最早发现的，对养蚕业危害最为严重的传染病病原之一。 本项目的前期研究通过荧光差异显示技术，比较分析了家蚕(Bombyxmori)对 均表达，但在抗性品系和近等基因系中的表达高于感性品系，并且添毒处理可促进该 基因的表达。本研究对该基因进行序列分析、原核和真核表达、转基因表达、亚细胞 定位及其与抗性的相关功能进行了研究，结果如下： 1．根据Bms3a的序列设计特异引物，通过PCR扩增方法获得该基因编码框序列， 其ORF为792 bp，编码263个氨基酸，其氨基酸序列与人的同源性为70．1％，与果 到表达。 2． 段与EGFP报告基因融合，用杆状病毒表达系统构建了2种重组病毒： 在细胞质内。 3．为研究过表达Bms3a对家蚕幼虫的影响，将重组病毒注射家蚕幼虫，调查幼 虫成活时间及成活率并进行统计学分析，结果显示重组病毒感染幼虫的存活时间明显 延长，说明过量表达S3a可能抑制病毒的复制。 转染家蚕细胞，获得了带有绿色荧光的转基因家蚕细胞。以BmNPV出芽病毒BV感 染Bms3a的转基因细胞系，对细胞中的多角体进行计数，结果发现在转基因细胞中 多角体的数量显著地比正常细胞中少，说明s3a的高表达可能抑制病毒在细胞中增 殖。 通过以上研究表明，Bms3a基因的表达产物主要定位在细胞质中，过表达Bms3a 的细胞有抑制病毒在细胞中增殖的作用，而且以重组Bms3a病毒侵染家蚕其存活时 问要明显长于对照组。本文的研究为揭开Bms3a基因的功能及家蚕抗NPV的机理提 供了一定的理论基础。 关键词： Bms3a，亚细胞定位，过表达，转基因，感染性，家蚕核型多角体病毒， BEVS II Abstract first morinuclear the insectvirus virus(BmNPV)was Bombyx polyhedrosis themost discoveredin silkworm diseaseisoneof serious history,In industry,BmNPV hazardofthreevirusdiseases． fluorescentdifferential ininitial study,weanalyzed Using display(FDD)technique differential of relatedtoBmNPVresistance resistant expressiongenes amonghighly strain silkwormstrain306andnear line silkwormNB，highlysusceptible isogenic 306NNZZ．A a mori Bombyx expressed geneencodingputat