家蚕体色突变黑(Bm)的分子定位及候选基因的筛选研究.pdfVIP

摘要 家蚕黑蛾(Bin)突变基因定位及 候选基因筛选 遗传学专业硕士研究生 李雪 指导教师张泽教授 摘 要 家蚕作为鳞翅目昆虫的代表，是至今唯一被人类完全驯化的经济类昆虫，也是遗传学研 究的极好的材料。并且家蚕遗传图谱也经历了近百年的研究，将大约300多个突变性状定位 在了230多个位点上。随着DNA分子标记技术的逐渐发展以及该技术在家蚕研究中的应用， 找到与突变基因连锁的分子标记，便可将这些基因在染色体上进行定位并进一步克隆相关性 状的基因。家蚕高精密遗传图谱和物理图谱的相继构建成功，EST数据库以及基因芯片和表达 图谱的制作成功，尤其是全基因组精细图谱的公布，为家蚕基因的精细定位以及后续的定位克 隆刨造了条件。正是由于这些进展，近年来家蚕的一些突变体基因才得以鉴定克隆。因此， 定位克隆工作成为家蚕遗传学的重要课题和工作热点。 西南大学蚕学与系统生物学研究所的蚕基因库目前保存有600多种重要的突变体，在这 些突变体中有许多是与生产、遗传育种等重要性状相关的。黑蛾(Blackmoth，Bm)是家蚕成 虫体色突变的一种。其表现性状为：成虫翅和胴体黑褐色，但幼虫体色与正常家蚕幼虫无区 别。该突变位于经典连锁图谱中第17连锁群O．0cM处。本研究是通过利用蝴蝶中控制颜色模 式多样性的超基因位点与家蚕进行同线性分析，利用同线性分析结果对该突变进行分子标记 的筛选并利用BC，群体的连锁分析进行定位研究及候选基因的预测，研究内容及主要结果如 下： (1)分子标记的筛选：利用蝴蝶中调控体表颜色图纹的一段保守的超基因位点序列与家 蚕基因组迸行同线性分析，得到在家蚕中的同源区域。根据同线性分析的结果设计引物，对 定位系统的亲本C108，大造一Bm近等位基因系，及大造一Bm的亲本黑蛾(Blackmoth)进行 多态性的筛选。得到2个可用多态性片段。并对已经完成的家蚕SSR分子标记中第17连锁群 的部分SSR引物进行筛选，得到1个可用多态性位点。 (2)分子标记的验证：利用BC-群体中的连锁群体的20个个体基冈组对以上3个分子标 记进行连锁验证，并对分子标记HD2和M．7进行部分区域的测序。结果显示3个分子标记都 与Bm连锁。 两南大学硕十学伊论文 (3)突变基因Bm的连锁定位分析：用验证的分子标记对培育的第17连锁群的近等位基 因系与C108杂交的BC．定位群体中的417个个体进行分析，得到正常个体与突变个体的带型。 其中有1个个体在标记M-7和Bm之间发生了交换，交换率为：0．24％，有6个个体在标记 4．0软件将突变基冈及3个分子标记整合成连锁幽谱。 交换，交换率为：2．16％。利用JoinMap 该图总距离为3．8cM，Bm被定位在分子标记M．7与HD2之间距M一7标记0．2cM的位置。 (4)候选基冈的筛选：通过对连锁定位分析结果以及由大造及火造一Bm近等位基因系为 材料制备的芯片数据进行分析，发现在分子标记M．7与HD2之间有两个差异表达的基因gene3 和gene4。 本实验的研究表明，同线性分析可以对基因定位提供有用信息。通过对分子标记的筛选 验证以及同交群体的连锁分析我们完成了对目标基冈Bm的定位和候选基冈的初步筛选，为进 一步克隆砌基因及其功能分析奠定了基础。 关键词：家蚕分子标记Bm基因定位 II Abstract Genetic etic OlofsilkwormsilkwormBlackIIlacmoth maPPmgpping and ofthecandidate 历)mutant screening genes Masterof Li