拮抗冬枣黑斑病链霉菌的获得及其产物活性研究.pdfVIP

摘 要 冬枣黑斑病是由细极链格孢（Alternaria tenuissima ）引起的一种真菌性病害，严 重制约着冬枣的产业发展。本文以沾化县冬枣栽培区的根际土壤作为菌种的获得来源，采 用琼脂块法筛选出一株对冬枣黑斑病病原有着很好的抑菌效果的放线菌，并进行了放线菌 分类鉴定，旨在为冬枣黑斑病生防药物的开发提供新的菌种。研究结果如下： 1、对山东沾化县冬枣栽培区不同质地、不同种植年限土壤微生物数量和养分状况进 行研究发现，沾化县冬枣栽培区根际土壤微生物总数明显高于根外 (非根际),呈现出明显 的根际效应。并且随着冬枣枣树种植年限增加，微生物总数呈现增加趋势。土壤中细菌数 量最多，其次为放线菌和真菌，并且链霉菌种类繁多。该地区砂质土壤中微生物数量高于 粘质土壤，因为砂质土壤通风性较好，有利于微生物生长。 2、本实验共分离到 520 株放线菌。用琼脂块法进行初步筛选，得到 8 株具有很好的 广谱抑菌性的放线菌，通过对发酵液进行抑菌活性测定，获得了一株既具有广谱抑菌性并 且对沾化冬枣黑斑病病原有显著地抑菌性的放线菌，命名为 K14，琼脂块法测得的对冬枣 黑斑病致病菌的平均抑菌圈直径达到 30 mm。 3、采用多相分类技术对拮抗放线菌 K14 进行了分类鉴定。将 K14 初步鉴定为白黄链 霉菌（Streptomyces alboflavus）。 4、采用单因素和正交试验相结合，对放线菌 K14 的发酵培养基和发酵工艺条件进行 了优化。得出 K14 菌株的发酵最适培养基为:葡萄糖为 3%磷酸氢二钠为 0.05%，氯化钠为 0.05%，硫酸镁为 0.1%，玉米粉为 2%，蛋白胨为 0.1%，黄豆粉为 4%，。最佳发酵工艺条件 为:摇瓶装液量为 100mL，发酵培养基初始 pH7.5，培养温度 28℃，摇床转速 180r/min， 发酵时间为 144h。 5、对放线菌 K14 发酵液中的抑菌活性物质的稳定性进行研究。试验表明，菌株具有 良好的遗传稳定性，传代多次后仍然具有很高的抑菌活性。其活性产物具有较好的耐热性 和耐碱性，但是在酸性条件和紫外光照的环境下抑菌活性显著降低。 6、对发酵液的理化性质进行研究发现，该活性物质极性较强，是一种酯溶—水溶性 的抗生素，并且具有典型的碱性抗生素所具有的特征。由发酵萃取液的紫外全波段扫描和 薄层层析试验可知发酵液中抑菌活性物质可能为单一组分。 关键词：冬枣黑斑病 链霉菌 拮抗性 I Abstract The actinomycetes strains were screened from Zhanhua dong zao cultivation plots. An actinomycete strain had strong inhibition activity to Alternaria tenuissima was screened by agar block method. Then it was classified and identified. The study aimed at searching antagonistic actinomycetes and evaluating their potential in biocontrol of Black Spot disease in Jujube. Main contents and results of the study were listed as follows: Microbial quantity and nutrient in the soil with different character of Zhanhua dong zao cultivation plots were studied. The result indicated that the surface of root soil was markedly more favorable to microbe in the soil ，which represented