水稻OsSRT因的克隆及功能分析.pdfVIP

中文摘要 中文摘要 在蛋白质的修饰中，乙酰化扮演重要的角色，这种修饰从酵母到植物广泛存 在。从生物生长发育，细胞增殖，损伤修复中，有重要的影响，其乙酰化与组蛋 白的去乙酰化，存在动态平衡，其起关键作用的酶，乙酰基转移酶(HATs)和去 乙酰化酶(HDACs)扮演着重角色，其去乙酰化酶可以分成4个家族为RPD3、 HDAl、HD2以及SIR2家族，在不同类型的生物中有特别的作用。 SIR2家族作为一个NAD+依赖型组蛋白去乙酰化酶家族而熟知，它的结构 与其他家族成员的结构不同，也没有序列同源性，这同时也暗示了，SIR2组蛋 白去乙酰化酶具有特别的功能活性，已经研究表明SIR2家族在染色体的修饰， 染色体结构的改变，均具有作用，但是对于该家族在植物生长发育的作用，特别 是在植株胁迫方面的作用却鲜为人知。 象，首先Biozol法提取水稻总RNA，通过NCBI已知序列用软件设计引物，通 过RT-PCR手段扩增得到一段专一特异片段，经过测序ORF片段全长为1453bp， 与己知序列片段相似度达99％，为了进一步分析该基因在生长发育特别是在逆 载体成功转入农杆菌工程菌株中作为转基因的工程菌株；利用农杆菌介导法把该 pGWB2．OsSRTl载体转移到模式生物拟南芥中，对转基因植株To抗性筛选，以 及分子鉴定，确定阳性植株。 转基因植株的脯氨酸测定：分别把野生型wT、pB2、转基因型T2．OsSRTI一 50mmol／L 理一周后测定脯氨酸浓度变化，结果显示转基因型T2一OsSRTI．2在1 万方数据 黑龙江大学硕士论文 时脯氨酸的积累程度最大，分别是野生型和pB2的1．39和1．47倍，在甘露醇胁 H202，转基因型T2一 2分别是野生型与pB2的1．37和1．Il倍，在10mmol／L OsSRTI．2分别是野生型与pB2的1．12和1．2倍。 转基因植株的可溶性蛋白的测定：同样的培养方式，在上述浓度的NaCI处 NaCI 理，结果显示在100mmol／LT2．OsSRTl．2转基因型的可溶性蛋白的含量最 NaCi时，三者的可 高，分别是野生型与pB2的1．05和1．13倍，在150mmol／L 溶性蛋白含量均有所下降，但是转基因型的下降幅度较小，同样的处理方式下在 了最大值，分别是野生型与pB2型的1．10倍与1．08倍，另外在用H202胁迫时， pB2的1．28倍和1．09倍。 处理CAT的酶活性三者的差异较大，转基因型T2．OsSRTl．2分别是野生型与pB2 转基因组CAT的酶活性较大，分别是野生型与pB2型的】．12与1．07倍，在H202 1 和1．25倍。 关键词： 拟南芥；OsSRT组蛋白去乙酰化酶；逆境胁迫 万方数据 英文摘要 Abstract Histone isan of from to proteinsyeastplant． acetylationimportantm．odification In and histone development，cellproliferation，damagerepair．Theacetylation growth is an role．The a