沉默OsC4HOs4CL基因对水稻茎秆木质素含量和抗倒性影响的研究.pdfVIP

肿fil l I Ill[Il l I[III III Y1 735111 摘 要 Sativa 水稻(OryzaL．)茎秆的主要成分是木质素、纤维素和半纤维素。木质 素是细胞壁的重要组成成分，是维持植物正常结构、疏导水分和养料、防御病原 菌侵害的重要组分。由于木质素的结构复杂，在生产生活中很难被有效利用，不 但给人类的生产活动造成很多不便，而且污染人类赖以生存的环境。利用RNAi 技术，抑制木质素合成途径中关键酶基因OsC4H和Os4CL的表达，从源头上减 少木质素的产出，对养殖业、造纸业和环境保护等都具有非常重大的意义。本研 究通过对T1代转基因植株半定量RT．PCR分析、酶活测定、木质素和纤维素含 量测定、组织切片观察、倒伏指数和农艺性状的测定，分析了沉默OsC4H和 Os4CL基因对水稻茎秆木质素含量和抗倒性的影响，获得了以下研究结果： 1．通过潮霉素筛选和潮霉素磷酸转移酶基因(hpt)的PCR检测，从T1代 中鉴定出阳性植株，用作后续研究材料。转化载体上带有筛选标记基因(as．red)， 阳性转基因植株的成熟种子呈红色。 2．对转基因和野生型植株进行了半定量RT．PCR分析，发现Os4CL基因在 各株系中的转录水平有明显差异，其中4CLRNAi株系下降最为明显，其次是双 干扰株系，在C4HRNAi株系中Os4CL的转录水平与野生型相比没有明显差异。 OsC4H基因在各株系中的转录水平存在差异，在C4HRNAi株系中转录水平最 低，其次是双干扰株系，而4CLRNAi株系中，没有发现OsC4H的转录水平有 明显变化。 3．对转基因株系的4CL和C4H酶活分析比较。发现转基因株系的4CL酶 RNAi株系的4CL相对酶活下降 活相对于野生型都有不同程度降低，其中4CL 最明显，比野生型降低约28．3％。在各转基因株系中，C4H酶活下降幅度最大的 RNAi 是C4HRNAi株系，比野生型平均下降约25．5‰4CLRNAi株系、C4HL 株系和C4HLPRNAi株系依次比野生型下降约4．5％、11．6％和8．8％。 4．对转基因株系木质素和纤维素含量的测定结果表明，4CLRNAi株系、 C4H IⅢAi株系、C4HLRNAi株系和C4HLPRNAi株系的木质素含量分别比野 生型下降约27．5％、25．0％、19．2％和15．4％。而各转基因株系的纤维素含量都有 不同幅度的升高，4CLRNAi株系、C4HRNAi株系、C4HLRNAi株系和C4HLP RNAi株系与野生型相比，平均含量分别升高7．3％、4．2％、1．4％和4．2％。 5．对转基因株系茎秆冷冻切片显微观察发现：在10×视野下，转基因植株 茎秆的壁厚明显比野牛型的薄，大、小维管鞘分布比野牛型植株的疏散。在40 RNAi ×视野下发现，转基因植株的小维管鞘的颜色要比野生型的浅，其中C4HL 株系和C4HLP RNAi株系和4CL RNAi株系的颜色稍微比野生型的稍浅，C4H 基因降低了木质素在微管束部位的沉积。 6．对转基因植株进行了弯曲试验和倒伏指数的测定分析，结果显示：与野 生型相比4CL RNAi株系的倒伏指数平均降低53．2％，C4HRNAi株系平均降低 1．3％，C4HL RNAi株系平均降低36．5％，C4HLPRNAi株系平均降低30．5％。 7．对转基因株系进行了综合评价分析。发现C4HRNAi株系与野生型相比