海岛棉一个表面体蛋白基因Gbvdr3的克隆及其启动子的特征分析.pdfVIP

m㈣…删洲m4咖Ⅲ㈣Ⅲ0 Y2149709 摘 要 黄萎病是一种危害严重的土传维管束病害，其致病菌寄主范围广泛、致病力分化 明显，所以至今也没有找到有效的防治办法。抗黄萎病资源缺乏、黄萎病抗性遗传基 础狭窄、抗黄萎病育种周期长及育种方法单一等，是抗黄萎病育种存在的主要问题。 随着现代分子生物学技术的发展，转基因育种为选育新的抗病品种开拓了无限广阔的 i仃景。因此，抗黄萎病基因的克隆成为当前抗病研究的热点。 本研究从海岛棉中克隆了一个具有受体类似蛋白基因结构域的棉花抗性相关基 基因的相似性为49％。将该丢I因构建到由组成型启动子CaMV35S控制的植物过量表达 检测，得到转基因拟南芥5个植株。对转基因拟南芥进行功能验证表现出了不同程度 的抗病性。与野生型对照相比，转基因植株尽管也出现了一定的病症，但是植株仍然 可以J下常结实。抗病性鉴定结果显示该基因过量表达可以显著提高拟南芥对落叶型菌 系V991的抗性，而对非落叶型菌系BP2的抗性并无显著增强。 为了进一步研究G6v办3基因在抗病过程中的作用，本研究还通过染色体步移法 (Genome 分析结果显示该启动子含有许多与抗病、胁迫和光调控相关的元件。本研究还构建了 G6v咖3基因启动子与G湘基因融合的重组载体并利用G6v咖j基因启动子驱动G吣基 因的表达来确认该基因的表达特征。通过农杆菌介导法将重组载体转入模式植物拟南 芥中并进行GUS组织化学染色。对转化后代进行抗性筛选和PCR鉴定共获得8株转基 因植株。GUS染色结果表明，G淞基因主要在根部、花器官和种子中表达，说明该启 动子是一个组织特异性启动子。G6v咖3的启动子分离与特征分析促进了对该基因的进 一步研究与应用。 关键词：黄萎病，棉花，G7)v办3基因，启动子，GUS染色 Abstract 1名rffcf，，f甜聊 wf疗causedsoil-bome isakindofseriousvascular by pathogens disease．7nle of比，．，fcf刀f“聊wf疗hasawidehost itisobviousofthe pathogen range，and di虢rentiationoftheVimlence．So胁 therewerenoe娲ctiVe fordisease way main f．orcottonresistance controlling．’Iheproblem breedingagainst阮，．，fcff，f甜，押wf厅 includelackofresistanceresourcesin narrow basisoftheresistanceof cotton，thegenetic anda and 舱，ffcfⅣf甜，托}竹，，，along methodsoon．Withthe breedingperiod singlebreeding ofmodem deVelopmentmoleculartechni has biologyques，transgenicbreedingopenedup broad for newdisease—resistallt resistance prospectsbreeding