海洋解脂耶罗威酵母菌产柠檬酸的研究.pdf

一．． 童堂坚堕墅翌壁垩壁里堕兰量堡堕箜婴窒 一一—— ——-—————————●-———————————————————--————————’—————_————————————————————_——————————一一 海洋解脂耶罗威亚酵母菌产柠檬酸的研究 摘要 柠檬酸是一种重要的有机酸，在制药业、食品业及化妆业等具有极多的用 途，并对人体健康有一定的益处。工业柠檬酸主要是玉米、红薯等粮食作物通 过发酵方式获得的。近年来世界粮食短缺，价格飞涨，使柠檬酸产品的低价优 势不断减小。木薯淀粉和菊粉是新型工业非粮食原料，其水解产物分别为葡萄 糖和果糖，是生产柠檬酸的良好碳源，将这2种非粮食原料运用于柠檬酸的工 业生产，在降低成本、节约粮食资源和粮食安全等方面具有良好的应用前景。 目前，柠檬酸的工业生产菌株主要是黑曲霉(Aspergillusniger)，但该菌发 酵产酸易引起环境污染且其菌体结构不利于遗传改造。产酸酵母菌解脂耶罗威 亚酵母(Yarrowia lipolytica)能弥补黑曲霉产酸的不足，因而成为近年来研究的 热点。为了扩大产酸酵母菌种的筛选范围，我们对实验室现保存120株海洋解 脂耶罗威亚酵母菌进行了筛选，获得了1株高产柠檬酸的菌株Z lipolytica 4-0．7 发酵产酸量为24．0 g／1(柠檬酸生产力0．20g／lh)，高于陆地同种酵母菌相同 条件下的发酵产酸量。通过进一步研究发现该菌发酵产酸的最佳碳源为葡萄糖， 其用于产酸培养的最适浓度为40．0 g／1，发酵产酸量为25．5士1．2 g／1(0．21g／lh)。 木薯淀粉(Cassavastrach)应用于柠檬酸生产的前提是产酸菌株必须具备 水解木薯淀粉的能力，但ZlipolyticaSWJ．1b不能分泌淀粉酶，且外源淀粉酶 (Amylase)基因在ZlipolyticaSWJ—lb中难以表达。本实验室研究发现扣囊复膜 011 酵母(Saccharomycopsisfibuligera)IFO1可以产生大量的淀粉酶，可使用该 菌产生的淀粉酶先将木薯淀粉水解，所得木薯淀粉水解液(碳源浓度40．0鲫) 进而被用于发酵产酸，其柠檬酸产量为29．4 4-0．3∥1(0．25∥lh)。而在2．1发酵 罐中分批补料发酵培养时，柠檬酸产量达60．2 4-1．8∥l(0．21h)。 g／1 最近几年我们实验室研究发现菊粉(Inulin)也是发酵工业很好的原料，Z lipolyticaSWJ-lb同样不能产生菊粉酶，为了使产酸菌株能够直接利用菊粉发酵 产酸以简化发酵生产工艺，我们将菊粉酶活力较高的马克思克鲁维酵母 (Kluyveromyeesmarxianus)CBS lipolyticaSWJ—lb的基因组DNA，并通过表面展示技术将该基因表达的菊粉酶 IV 海洋解脂耶罗威亚酵母菌产柠檬酸的研究 展不于Zlipolytica SWJ-lb细胞表面，得到具稳定菊粉酶活力的转化菌株 4-0．8 INU-87，其表面展示菊粉酶活力为22．6 U／mg细胞干重，具有较高的外切 酶活性。研究发现该表面展示菊粉酶与菌株Kmarxianus的原始菊粉酶性质基 本一致，且表面展示技术的应用使该酶易于回收利