海洋微藻类病毒宿主相互作用的分子机制初探.pdfVIP

海洋微藻类病毒与宿主相互作用的分子机制初探 摘 要 病毒感染、杀死和裂解浮游植物是海洋生态系统中的普遍现象，且病毒感染是 导致浮游植物自然死亡的主要因素之一。在海洋生态系统中，病毒控制着浮游植物 群落的丰度和结构，并对赤潮的生消起着调控作用。一个可能的假设就是：藻类病 毒可以用于阻止或终止有害藻赤潮的形成。但对这些作用的详细过程及其调节机制 的了解尚十分有限，特别是在病毒与藻类宿主相互作用关系方面的研究则刚刚起 步。 本论文以海洋赤潮微藻球石藻Emiliania huxleyi和非赤潮藻金色刺球藻 ericina为研究对象，在室内纯培养条件下，建立病毒与宿主稳定 Chrysochromulina 的感染体系。采用分子细胞生物学及蛋白质组研究等技术，就海洋微藻类病毒与宿主之 间相互作用的分子机制进行了初步探讨，主要研究内容和结论如下： 通过蛋白免疫印迹技术，研究了病毒感染对海洋球石藻E．huxleyi和刺球金色藻 EhV基因的复制和转录可能不依赖于宿主细胞周期的运行；而CeV感染后出现G2 期的延长则可能导致部分宿主细胞进入下一个S期，为CeV的核酸代谢提供更多所 需蛋白，因此推测CeV的复制和转录可能依赖于宿主细胞周期。微藻类病毒基因表 达依赖或不依赖于宿主细胞周期将可能对藻类病毒感染与宿主细胞周期进程之间 的相互作用具有潜在的意义，可能也正是由于这种相互作用机制的不同最终决定了 宿主藻在自然海域中的丰度。本研究结果提示，微藻类病毒感染通过对宿主特定细 胞周期调控因子的选择性激活或抑制以利于病毒基因的有效复制和表达。 采用多种细胞凋亡检测技术分析了病毒感染诱导海洋球石藻E．huxleyi细胞凋 亡的形态学及生化代谢特征。球石藻E．huxleyi在病毒感染后出现了典型的凋亡形态 学特征，如细胞核固缩、细胞质的收缩及空泡化、细胞核的消失和凋亡小体的形成 等；在病毒感染的宿主细胞中检测到凋亡特征蛋白酶caspase．3的活性表达形式并首 I 结果提示：在自然海域中，细胞程序性死亡可能是部分微藻类病毒感染、裂解并导 致宿主死亡的途径之一，而病毒对宿主细胞周期的不同调控方式则可能是导致宿主细胞 启动或抑制凋亡程序的直接原因。 另外，病毒感染诱导的浮游植物细胞凋亡可能存在与 高等动植物类似的Caspase蛋白酶参与的凋亡信号途径。 对该蛋白的主要理化性质及其二、三级结构等进行了分析预测。结果表明，球石藻 大约在31～39％；EhMC序列包含338个氨基酸残基，其中带负电荷的氨基酸残基 点氨基酸基序，该酶在其N端没有明显的内质网合成蛋白的信号序列，表明该酶是 在胞质游离核糖体上合成，属于胞质蛋白；对该蛋白酶二、三级结构分析预测结果 进一步证实EhMC是caspases超家族成员之一。 为了能从蛋白质水平认识海洋病毒与宿主之间的相互作用关系，我们采用 组学研究。经优化条件，获得了病毒感染和对照组总蛋白分辨率高、重复性好的双 向电泳图谱， v8．0．1软件对得到的凝胶图像进行了分析。结果表明： 并用PDQuest 50Ilg球石藻蛋白经双向电泳及银染后在每块凝胶上平均可以检测出220个蛋白点， 的蛋白表达量及分布情况基本相同；感染的早、中、晚期分别有1l、14及lO个蛋 白出现了表达量的上调，l8、11及11个蛋白出现了表达量的下调；感染后超过50％ 的蛋白在表达图谱上新出现或消失。对其中8个表达量差异显著的蛋白进行了 达上调的蛋白被成功鉴定为类酰基磷酸酯酶蛋白，功能预测发现其对凋亡抑制途径 具有负调控作用，这一结果也间接证实了EhV感染能够诱导宿主细胞凋亡这一现 象。海洋球石藻E．huxley病毒感染的宿主细胞比较蛋白质组学研究结果为进一步探 索该藻对病毒感染的总体反应机制奠定了基础。 关键词海洋微藻，海洋病毒，细胞周期，细胞凋亡，蛋白质组学，生物信息学 n oftheinteractionbetweenmarine Molecularmechanism hosts