某些裂殖酵母核体基因和非核糖体基因的鄗除及表型比较研究.pdfVIP

中文摘要 核糖体蛋白(ribosomal protein，RP)是组成核糖体的重要单位，其主要功 能是参与核糖体的组装和蛋白质的翻译。核糖体由大量核糖体蛋白以及核糖体 白编码基因作为候选完成基因转录这一巨大的工程【l】。本实验室前期已成功敲除 核糖体蛋白基因L32—7和L32．2，并发现敲除菌株在YPD液体培养基中培养时， 出现数以百计的细胞凝集在一起形成肉眼可见细胞团的细胞凝絮现象 (flocculation)。为进一步了解引起酵母细胞絮凝的原因，本文在此基础上，通 过查阅文献(Anabelle eta1．，2003)【2】，从敲除不引起致死的酵母 Decottignies 基因中随机选择敲除核糖体蛋白基因L21．2和L9．2以及非核糖体蛋白基因 段的上下游基因及筛选抗性基因KanMX6，最后将三片段同时加入PCR管中，用 同源臂的上游Pl和下游P2通过PCR获得全长的敲除片段。应用Li-Ac转化法， 将敲除片段导入受体菌SP—QOl，YPD液体培养基培养之后涂G418抗性平板，筛 选阳性克隆。对阳性克隆提取基因组PCR验证，保存验证正确的阳性菌株。通过 对这六株基因敲除菌株的培养，细胞形态的观察和生长曲线的测定，发现敲除核 糖体蛋白基因的菌株长势缓慢，且都有细胞凝絮现象；而敲除非核糖体蛋白基因 的菌株则无此现象。到此我们可以初步判断裂殖酵母细胞核糖体蛋白表达水平不 足造成的核糖体损伤可以引起酵母细胞的凝絮现象。对于具体的引起细胞凝絮的 作用机制还需更深入的验证。 关键词：核糖体蛋白细胞凝絮细胞形态生长曲线基因敲除 Abstract Ribosomal the ofribosomes protein(ribosomal protein,RP)isimportantcomposition main unit，its functionisto inthe and ribosomes participate assemblyprotein translation．Ribosomesare assembleda ribosomesand completely by large protein ribosomes nucleoli．Thereareabout150 ofrRNA and RNA(rRNA)in species genes 137 ofribosomal asacandidateinthe species pro-teincodinggenes gene great ectof lab has knocked proj transcrip-tion．Theearly successfullyoutribosomal L32一』and foundthattheknockout proteingene L32·2，and strainsin medium liquid hundredsofcells visible asafloe (YPD)，appear agglutinatetogetherforminggroups ordertounderst