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当归多糖对点带石斑鱼非特异性免疫力的影响 摘 要 sinensis 当归多糖(Angelicapolysaccharide，ASP)对哺乳动物具有免疫调 节作用，但对水产动物是否具有免疫调节作用尚未见报道。本文首先从中草药 sinensis(Oliv．)Diels中提纯当归多糖，并对当归多糖亚组分进行 当归Angelica 结构分析。然后通过喂食、腹腔注射和体外试验研究当归多糖对点带石斑鱼 malabaricus)非特异性免疫力的影响，为当归多糖在水产养殖上 (Epinephelus 的应用提供理论依据。 本论文主要研究内容和结论概况如下。用水煮醇沉法从中草药当归中提取 当归粗多糖，乙醇、丙酮脱色、Sevag法除蛋白质，透析、冻干得当归多糖P0。 NaCl、0．2M 将当归多糖PO溶液用DE．52纤维素柱层析，依次用蒸馏水、0．IM NaCl、0．4M NaCl洗脱得当归多糖P1、P2、P3和P4四种亚组分。采用高效液 相色谱、红外光谱和甲基化法研究当归多糖P1、P2、P3分子量和结构。结果 表明：当归多糖Pl、P2、P3和P4中蛋白质分别为2．21％、1．38％、2．53％和2．34％， 总糖分别为95．10％、94．73％、81．68％和79．51％，还原糖分别为5．75％、4．85％、 Da，2．34x10’Da 4．86％和4．77％。当归多糖Pl、P2、P3分子量分别为4．12x105 和1．94×105 Da。当归多糖Pl、P2、P3的单糖组成分别为Glc：Xyl：Gal=18：3：1， 均为13构型的毗喃环。当归多糖P1中Glcp为1_÷3，6、1—3和1一连接，Xy切 1—3，6、1_3和1_连接，Xylp为1—3连接。 为研究当归多糖对点带石斑鱼非特异性免疫力和抗病力的影响，将当归多 糖PO按0、500、3000mg／l(g添加到饲料中，喂食点带石斑鱼4、8、12周后取 样。结果表明：当归多糖P0能显著提高点带石斑鱼血液白细胞吞噬能力，血清 溶菌酶(LZM)活力，头肾白细胞呼吸爆发活力、增殖活力和吞噬能力，降低 Edwardsiellatarda攻毒后点带石斑鱼的累积死亡率。用3000 mg／l(g的当归多糖 P0连续喂食12周，点带石斑鱼非特异性免疫力和抗病力最高。 将当归多糖P0按0、500、3000 d，研 mg／l(g添3n至JJ饲料中，连续喂食101 究当归多糖P0对点带石斑鱼生长和非特异性免疫力的影响。结果表明：当归多 糖P0对点带石斑鱼摄食、生长、体表黏液抗菌活力、血清一氧化氮(NO)、总 蛋白、白蛋白、白蛋白／球蛋白(A／G)值影响不显著(pO．05)；低剂量的当归 多糖PO能显著提高体表黏液LZM活力，而高剂量的当归多糖PO能显著提高 血液自细胞数、NBT阳性细胞数，并能提高血液自细胞吞噬率和血清LZM活 力；当归多糖PO能极显著降低点带石斑鱼Etarda攻毒后的累积死亡率，500、 3000 mg／kg组的免疫保护率分别为45％、69％。 为研究当归多糖亚组分对点带石斑鱼非特异性免疫力的影响，将当归多糖 Pl、P2、P3按20 mg／kg体重的剂量腹腔点带石斑鱼，以当归多糖PO做对照， d取样。结果发现： 以无菌PBS做空白，在注射前和注射后第3、7、14、2】、28 当归多糖P0及其亚组分能显著提高点带石斑鱼体表黏液LZM活力、血液白细 胞数和NBT阳性细胞数、血清LZM活力、NO含量和A／G值。当归多糖P0 能显著提高点带石斑鱼体表黏液抗菌活力，而各多糖亚组分对黏液抗菌活力影 响不显著。当归多糖P0及其亚组分对点带石斑鱼非特异性免疫力具有时间一效 应关系：注射当归多糖免疫指标升高，注射后28d恢复到空白组水平。注射当